MaxSortin® CD4 آئسولیشن کٹ

MaxSortin® CD4 Separation Kit انسانی CD4+ T خلیات کو ترتیب دینے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔ خلیات کے ساتھ نانوسکل CD4 علیحدگی مقناطیسی موتیوں کی انکیوبٹنگ کے ذریعے، CD4+ T خلیوں کی چھانٹی حاصل کی جا سکتی ہے۔ نانوسکل CD4 علیحدگی مقناطیسی موتیوں کو پیریفرل بلڈ مونو نیوکلیئر سیلز (PBMCs) کے ساتھ انکیوبیٹ کیا جاتا ہے اور پھر مقناطیسی علیحدگی کا نشانہ بنایا جاتا ہے، جو CD4+ T خلیات کی علیحدگی اور افزودگی کو قابل بناتا ہے، CD4+ T خلیات کو صاف کرنے میں کردار ادا کرتا ہے اور سیل تھراپی مصنوعات کی پیداوار پر لاگو ہوتا ہے۔

1. PBS بفر میں انسانی PBMCs کو دوبارہ معطل کریں جس میں 1% ہیومن سیرم البومین (HSA) ہو۔ گنتی کے لیے نمونہ لیں اور 1×10⁷ سیلز کو 1.5 mL EP ٹیوب میں منتقل کریں۔ پھر 5 منٹ کے لیے 1500 rpm پر سینٹری فیوج کریں۔
2. سپرنٹنٹ کو ضائع کر دیں، خلیوں کو بحال کرنے کے لیے 80 μL MaxSortin® Cell Sorting Buffer لیں، 20 μL CD4 الگ کرنے والے مقناطیسی موتیوں کو شامل کریں، اچھی طرح مکس کریں اور پھر انہیں 15 منٹ تک انکیوبیشن کے لیے 2 - 8 ° C پر فریج میں رکھیں۔
3. MaxSortin® L-Separation کالم لیں اور اسے Magnetic-activated cell sorting (MACS) سورٹر پر رکھیں، اور اسے 1 mL MaxSortin® Cell Sorting Buffer سے دو بار دھو لیں۔
4. وہ نمونہ لیں جس نے ریفریجریٹر سے 2 - 8 ° C پر انکیوبیشن مکمل کر لی ہے، 1 ملی لیٹر MACS محلول شامل کریں، 5 منٹ کے لیے 1500 rpm پر سینٹری فیوج کریں، اور سپرنٹنٹ کو ضائع کر دیں۔
5. سیلز کو دوبارہ معطل کرنے کے لیے MaxSortin® Cell Sorting Buffer کا 1 mL شامل کریں، نمونے کو علیحدگی کے کالم میں شامل کریں۔ قدرتی طور پر نکلنے کے بعد، MaxSortin® Cell Sorting Buffer کو دو حصوں میں شامل کریں، ہر بار 1 mL۔ 15 ملی لیٹر سینٹری فیوج ٹیوب میں پانی جمع کریں۔
6. تمام MaxSortin® سیل ترتیب دینے والا بفر ختم ہونے کے بعد، MACS سارٹر سے علیحدگی کے کالم کو ہٹا دیں اور اسے ایک اور نئی 15 ملی لیٹر سینٹرفیوج ٹیوب میں رکھیں۔ 3 ملی لیٹر MaxSortin® سیل ترتیب دینے والے بفر کو علیحدگی کے کالم میں شامل کریں اور اس پسٹن کا استعمال کریں جو سیپریشن کالم کے ساتھ آتا ہے تاکہ مائع کو براہ راست باہر دھکیل سکے۔
7. جمع شدہ مائع پر مشتمل 15 ملی لیٹر سینٹری فیوج ٹیوب کو افقی سینٹری فیوج اور سینٹری فیوج میں 1500 rpm پر 5 منٹ کے لیے رکھیں۔
8. سینٹرفیوگریشن کے بعد، سپرنٹنٹ کو ڈالیں، خلیات کو دوبارہ معطل کرنے کے لیے 1x Dulbecco's phosphate-buffered saline (DPBS) کا 1 mL لیں، خلیات کی گنتی کریں اور فلو سائٹومیٹری کا پتہ لگائیں۔