MaxSortin® CD4 İzolasyon Kiti

MaxSortin® CD4 Ayırma Kiti, insan CD4+ T hücrelerini ayırmak için kullanılabilir. Nanoölçekli CD4 ayırma manyetik boncuklarını hücrelerle inkübe ederek, CD4+ T hücrelerinin ayrılması sağlanabilir. Nanoölçekli CD4 ayırma manyetik boncukları, periferik kan mononükleer hücreleri (PBMC'ler) ile inkübe edilir ve daha sonra manyetik ayırmaya tabi tutulur, bu da CD4+ T hücrelerinin ayrılmasını ve zenginleştirilmesini sağlar, CD4+ T hücrelerinin saflaştırılmasında rol oynar ve hücre terapisi ürünlerinin üretiminde uygulanabilir.

1. İnsan PBMC'lerini %1 insan serum albümini (HSA) içeren PBS tamponunda yeniden süspanse edin. Sayım için bir örnek alın ve 1×10⁷ hücreyi 1,5 mL EP tüpüne aktarın. Ardından 1500 rpm'de 5 dakika santrifüj edin.
2. Üstteki sıvıyı dökün, hücreleri yeniden süspanse etmek için 80 μL MaxSortin® Hücre Ayırma Tamponu alın, 20 μL CD4 ayırma manyetik boncuk ekleyin, iyice karıştırın ve daha sonra 15 dakika inkübasyon için 2 - 8 °C'de bir buzdolabına koyun.
3. MaxSortin® L-Ayırma Kolonunu alın ve manyetik aktiveli hücre ayırma (MACS) ayırıcıya yerleştirin ve 1 mL MaxSortin® Hücre Ayırma Tamponu ile iki kez yıkayın.
4. 2 - 8 °C’de inkübasyonu tamamlanan örneği buzdolabından çıkarın, üzerine 1 mL MACS solüsyonu ekleyin, 1500 rpm’de 5 dakika santrifüj edin ve üstteki sıvıyı dökün.
5. Hücreleri yeniden süspanse etmek için 1 mL MaxSortin® Hücre Sıralama Tamponu ekleyin, numuneyi ayırma kolonuna ekleyin. Doğal olarak aktıktan sonra, MaxSortin® Hücre Sıralama Tamponunu iki porsiyon halinde, her seferinde 1 mL olacak şekilde ekleyin. Efluantı 15 mL'lik bir santrifüj tüpünde toplayın.
6. Tüm MaxSortin® Hücre Sıralama Tamponu aktıktan sonra, ayırma sütununu MACS sıralayıcısından çıkarın ve başka bir yeni 15 mL santrifüj tüpüne yerleştirin. Ayırma sütununa 3 mL MaxSortin® Hücre Sıralama Tamponu ekleyin ve sıvıyı doğrudan dışarı itmek için ayırma sütunuyla birlikte gelen pistonu kullanın.
7. Toplanan sıvının bulunduğu 15 mL’lik santrifüj tüpünü yatay santrifüje yerleştirin ve 1500 rpm’de 5 dakika santrifüjleyin.
8. Santrifüjlemeden sonra üstteki sıvıyı dökün, hücreleri yeniden süspanse etmek için 1 mL 1× Dulbecco fosfat tamponlu salin (DPBS) solüsyonu alın, hücreleri sayın ve akım sitometrisi tespiti yapın.