Маҷмӯаи изолятсияи MaxSortin® CD4

Маҷмӯаи ҷудокунии MaxSortin® CD4 метавонад барои ҷудо кардани ҳуҷайраҳои CD4+ T-и инсон истифода шавад. Тавассути инкубатсияи маҳтобҳои магнитии ҷудокунии CD4 бо ҳуҷайраҳо, ба навъбандии ҳуҷайраҳои CD4+ Т ноил шудан мумкин аст. Доруҳои магнитии ҷудокунии CD4-и наномикёс бо ҳуҷайраҳои мононуклеарии хуни периферӣ (PBMCs) инкубатсия карда мешаванд ва сипас ба ҷудошавии магнитӣ дучор мешаванд, ки ҷудо ва ғанисозии ҳуҷайраҳои CD4+ T, ки дар тоза кардани ҳуҷайраҳои CD4+ T нақш мебозанд ва барои истеҳсоли маҳсулоти табобати ҳуҷайра истифода мешаванд.

1. PBMC-ҳои одамро дар буфери PBS, ки дорои 1% альбумини хунобаи инсон (HSA) мебошанд, боздоред. Барои ҳисоб кардан намуна гиред ва ҳуҷайраҳои 1×10⁷ро ба найчаи 1,5 мл EP интиқол диҳед. Сипас дар 1500 rpm барои 5 дақиқа центрифуга кунед.
2. Супернатантро партоед, 80 мкл буфери ҷудокунии ҳуҷайраҳои MaxSortin®-ро барои дубора боздоштани ҳуҷайраҳо гиред, ба 20 мкл маҳтобҳои магнитии ҷудокунии CD4 илова кунед, хуб омехта кунед ва сипас онҳоро дар яхдон дар ҳарорати 2 - 8 °C барои инкубатсия барои 15 дақиқа ҷойгир кунед.
3. Сутуни ҷудокунии MaxSortin® L-Ҷудокуниро бигиред ва онро ба навъбандии бо магнити фаъолшуда (MACS) ҷудокунанда ҷойгир кунед ва онро бо 1 мл буфери ҷудокунии ҳуҷайраҳои MaxSortin® ду маротиба бишӯед.
4. Намунаеро, ки инкубатсияро дар 2 - 8 °C анҷом додааст, аз яхдон гиред, 1 мл маҳлули MACS илова кунед, дар 1500 чархзанӣ барои 5 дақиқа центрифуга кунед ва супернатантро партоед.
5. Барои дубора боздоштани ҳуҷайраҳо 1 мл буфери ҷудокунии ҳуҷайраҳои MaxSortin® илова кунед, намунаро ба сутуни ҷудокунӣ илова кунед. Пас аз он ки он ба таври табиӣ ҷорӣ мешавад, буфери ҷудокунии ҳуҷайраҳои MaxSortin®-ро дар ду қисм, ҳар дафъа 1 мл илова кунед. Оби партовро дар найчаи центрифугаи 15 мл ҷамъ кунед.
6. Пас аз он ки тамоми буфери ҷудокунии ҳуҷайраҳои MaxSortin® берун шуд, сутуни ҷудокуниро аз навъбандии MACS хориҷ кунед ва онро дар найчаи нави сентрифугаи 15 мл ҷойгир кунед. Ба сутуни ҷудокунӣ 3 мл буфери ҷудокунии ҳуҷайраҳои MaxSortin® илова кунед ва поршенеро, ки бо сутуни ҷудокунӣ меояд, истифода баред, то моеъро мустақиман берун кунад.
7. Туби центрифугаи 15 мл, ки моеъи ҷамъшуда дорад, ба центрифугаи уфуқӣ ҷойгир кунед ва дар 1500 чархзанӣ барои 5 дақиқа центрифуга кунед.
8. Пас аз центрифугакунӣ, супернатантро бирезед, 1 мл маҳлули шӯри фосфати буферии Дулбекко (DPBS) -ро гиред, то ҳуҷайраҳоро дубора суспендия кунед, ҳуҷайраҳоро ҳисоб кунед ва муайянкунии цитометрияи ҷараёнро гузаронед.