Набор для изоляции MaxSortin® CD4

Набор для разделения MaxSortin® CD4 может использоваться для сортировки человеческих CD4+ T-клеток. Сортировка CD4+ T-клеток может быть достигнута путем инкубации наноразмерных магнитных шариков для разделения CD4 с клетками. Наноразмерные магнитные шарики для разделения CD4 инкубируются с мононуклеарными клетками периферической крови (PBMC), а затем подвергаются магнитному разделению, что позволяет разделять и обогащать CD4+ T-клетки, что играет роль в очистке CD4+ T-клеток и применимо для производства продуктов клеточной терапии.

1. Ресуспендируйте человеческие PBMC в буфере PBS, содержащем 1% человеческого сывороточного альбумина (HSA). Возьмите образец для подсчета и перенесите 1×10⁷ клеток в 1,5 мл пробирку EP. Затем центрифугируйте при 1500 об/мин в течение 5 минут.
2. Удалите супернатант, возьмите 80 мкл буфера для сортировки клеток MaxSortin®, чтобы ресуспендировать клетки, добавьте 20 мкл магнитных шариков для разделения CD4, тщательно перемешайте и поместите в холодильник при температуре 2–8 °C для инкубации в течение 15 минут.
3. Возьмите колонку MaxSortin® L-Separation и поместите ее в сортировщик для магнитно-активируемой сортировки клеток (MACS), затем дважды промойте ее 1 мл буфера для сортировки клеток MaxSortin®.
4. Достаньте образец, завершивший инкубацию, из холодильника при температуре 2–8 °C, добавьте 1 мл раствора MACS, центрифугируйте при 1500 об/мин в течение 5 минут и слейте супернатант.
5. Добавьте 1 мл буфера сортировки клеток MaxSortin® для ресуспендирования клеток, добавьте образец в разделительную колонку. После того, как он вытечет естественным образом, добавьте буфер сортировки клеток MaxSortin® двумя порциями, по 1 мл каждая. Соберите эффлюент в центрифужную пробирку объемом 15 мл.
6. После того, как весь буфер сортировки клеток MaxSortin® вытечет, извлеките разделительную колонку из сортировщика MACS и поместите ее в другую новую центрифужную пробирку объемом 15 мл. Добавьте 3 мл буфера сортировки клеток MaxSortin® в разделительную колонку и используйте поршень, который идет в комплекте с разделительной колонкой, чтобы напрямую вытолкнуть жидкость.
7. Поместите центрифужную пробирку объемом 15 мл, содержащую собранную жидкость, в горизонтальную центрифугу и центрифугируйте при 1500 об/мин в течение 5 минут.
8. После центрифугирования слейте супернатант, возьмите 1 мл 1× раствора фосфатного буфера Дульбекко (DPBS) для ресуспендирования клеток, подсчитайте количество клеток и проведите анализ методом проточной цитометрии.