Kit de isolamento MaxSortin® CD4

O Kit de Separação de CD4 MaxSortin® pode ser usado para separar células T CD4+ humanas. Através da incubação de esferas magnéticas de separação de CD4 em nanoescala com células, a separação de células T CD4+ pode ser alcançada. As esferas magnéticas de separação de CD4 em nanoescala são incubadas com células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) e, em seguida, submetidas à separação magnética, o que permite a separação e o enriquecimento de células T CD4+, desempenhando um papel na purificação de células T CD4+ e sendo aplicável à produção de produtos de terapia celular.

1. Ressuspenda PBMCs humanas em tampão PBS contendo 1% de albumina sérica humana (HSA). Colete uma amostra para contagem e transfira 1×10⁷ células para um tubo EP de 1,5 mL. Em seguida, centrifugue a 1500 rpm por 5 minutos.
2. Descarte o sobrenadante, pegue 80 μL de MaxSortin® Cell Sorting Buffer para ressuspender as células, adicione 20 μL de esferas magnéticas de separação de CD4, misture bem e coloque-as em um refrigerador de 2 a 8 °C para incubação por 15 minutos.
3. Pegue a coluna de separação MaxSortin® L e coloque-a no classificador de classificação de células ativadas magneticamente (MACS) e enxágue-a duas vezes com 1 mL de tampão de classificação de células MaxSortin®.
4. Retire a amostra que concluiu a incubação do refrigerador a 2 - 8 °C, adicione 1 mL de solução MACS, centrifugue a 1500 rpm por 5 minutos e descarte o sobrenadante.
5. Adicione 1 mL de Tampão de Classificação Celular MaxSortin® para ressuspender as células e adicione a amostra à coluna de separação. Após o fluxo natural, adicione o Tampão de Classificação Celular MaxSortin® em duas porções, 1 mL cada. Colete o efluente em um tubo de centrífuga de 15 mL.
6. Após todo o Tampão de Classificação Celular MaxSortin® ter escoado, remova a coluna de separação do separador MACS e coloque-a em outro tubo de centrífuga novo de 15 mL. Adicione 3 mL de Tampão de Classificação Celular MaxSortin® à coluna de separação e use o pistão que acompanha a coluna para empurrar o líquido diretamente para fora.
7. Coloque o tubo de centrífuga de 15 mL contendo o líquido coletado em uma centrífuga horizontal e centrifugue a 1500 rpm por 5 minutos.
8. Após a centrifugação, despeje o sobrenadante, pegue 1 mL de solução salina tamponada com fosfato de Dulbecco (DPBS) 1× para ressuspender as células, conte as células e realize a detecção por citometria de fluxo.