Zestaw do izolacji CD4 MaxSortin®

Zestaw MaxSortin® CD4 Separation Kit można wykorzystać do sortowania ludzkich komórek CD4+ T. Poprzez inkubację nanometrycznych kulek magnetycznych do separacji CD4 z komórkami można uzyskać sortowanie komórek CD4+ T. Nanometryczne kulki magnetyczne do separacji CD4 są inkubowane z mononuklearnymi komórkami krwi obwodowej (PBMC), a następnie poddawane separacji magnetycznej, która umożliwia separację i wzbogacenie komórek CD4+ T, odgrywając rolę w oczyszczaniu komórek CD4+ T i jest stosowana w produkcji produktów terapii komórkowej.

1. Resuspend ludzkie PBMC w buforze PBS zawierającym 1% ludzkiej albuminy surowicy (HSA). Pobierz próbkę do liczenia i przenieś 1×10⁷ komórek do probówki EP o pojemności 1,5 ml. Następnie wiruj przy 1500 obr./min przez 5 minut.
2. Odrzuć supernatant, pobierz 80 μl buforu do sortowania komórek MaxSortin® w celu resuscytacji komórek, dodaj 20 μl magnetycznych kulek separujących CD4, dobrze wymieszaj, a następnie umieść w lodówce w temperaturze 2–8 °C na 15 minut w celu inkubacji.
3. Umieść kolumnę MaxSortin® L-Separation w sorterze MACS (magnetycznie aktywowanym) i przepłucz ją dwukrotnie 1 ml buforu do sortowania komórek MaxSortin®.
4. Wyjmij próbkę, której inkubacja zakończyła się, z lodówki w temperaturze 2–8 °C, dodaj 1 ml roztworu MACS, wiruj przy 1500 obr./min przez 5 minut i usuń supernatant.
5. Dodaj 1 ml buforu MaxSortin® Cell Sorting Buffer, aby ponownie zawiesić komórki, dodaj próbkę do kolumny separacyjnej. Po jej naturalnym wypłynięciu dodaj bufor MaxSortin® Cell Sorting Buffer w dwóch porcjach, po 1 ml za każdym razem. Zbierz ścieki w probówce wirówkowej o pojemności 15 ml.
6. Po wypłynięciu całego buforu MaxSortin® Cell Sorting Buffer wyjmij kolumnę separacyjną z sortera MACS i umieść ją w innej nowej probówce wirówkowej o pojemności 15 ml. Dodaj 3 ml buforu MaxSortin® Cell Sorting Buffer do kolumny separacyjnej i użyj tłoka dołączonego do kolumny separacyjnej, aby wypchnąć ciecz bezpośrednio.
7. Umieścić probówkę wirówkową o pojemności 15 ml zawierającą zebrany płyn w wirówce poziomej i wirować przy 1500 obr./min przez 5 minut.
8. Po odwirowaniu zlej supernatant, pobierz 1 ml 1-krotnego roztworu buforowanego fosforanem Dulbecco (DPBS) w celu resuscytacji komórek, policz komórki i przeprowadź wykrywanie metodą cytometrii przepływowej.