Zestaw do izolacji MaxSortin® CD14

Zestaw MaxSortin® CD14 Separation Kit można stosować do wzbogacania lub usuwania monocytów i makrofagów z ludzkich mononuklearnych komórek krwi obwodowej (PBMC). Poprzez inkubację nanometrycznych magnetycznych kulek separacyjnych CD14 z komórkami można osiągnąć sortowanie komórek CD14+. Poprzez użycie magnetycznych kulek separacyjnych MaxSortin® CD14 do inkubacji z PBMC, a następnie przeprowadzenie separacji magnetycznej, komórki CD14+ można oddzielić i wzbogacić, odgrywając rolę w usuwaniu lub oczyszczaniu komórek CD14+.

1. Zawieś ponownie ludzkie PBMC w buforze PBS zawierającym 1% ludzkiej albuminy surowicy (HSA). Pobierz próbkę do zliczenia i przenieś 1×10⁷ komórek do probówki Ep o pojemności 1,5 ml. Następnie wiruj przy 1500 obr./min przez 5 minut.
2. Odrzuć supernatant, pobierz 80 μl buforu do sortowania komórek MaxSortin® w celu resuscytacji komórek, dodaj 20 μl magnetycznych kulek separujących CD14 MaxSortin®, dobrze wymieszaj, a następnie umieść w lodówce w temperaturze 2–8 °C na 15 minut w celu inkubacji.
3. Umieść kolumnę MaxSortin® L-Separation w sorterze MACS (magnetycznie aktywowanym) i przepłucz ją dwukrotnie 1 ml buforu do sortowania komórek MaxSortin®.
4. Wyjmij próbkę, której inkubacja zakończyła się, z lodówki w temperaturze 2–8°C, dodaj 1 ml buforu do sortowania komórek MaxSortin®, odwiruj przy 1500 obr./min przez 5 minut i usuń supernatant.
5. Dodaj 1 ml buforu MaxSortin® Cell Sorting Buffer, aby ponownie zawiesić komórki, dodaj próbkę do kolumny separacyjnej. Po jej naturalnym wypłynięciu dodaj bufor MaxSortin® Cell Sorting Buffer w dwóch porcjach, po 1 ml za każdym razem. Zbierz ścieki w probówce o pojemności 15 ml.
6. Po wypłynięciu całego buforu MaxSortin® Cell Sorting Buffer wyjmij kolumnę separacyjną z sortera MACS i umieść ją w innej nowej probówce wirówkowej o pojemności 15 ml. Dodaj 3 ml buforu MaxSortin® Cell Sorting Buffer do kolumny separacyjnej i użyj tłoka dołączonego do kolumny separacyjnej, aby wypchnąć ciecz bezpośrednio.
7. Umieścić probówkę wirówkową o pojemności 15 ml zawierającą zebrany płyn w wirówce poziomej i wirować przy 1500 obr./min przez 5 minut.
8. Po odwirowaniu zlej supernatant, pobierz 1 ml 1-krotnego roztworu buforowanego fosforanem Dulbecco (DPBS) w celu resuscytacji komórek, policz komórki i przeprowadź wykrywanie metodą cytometrii przepływowej.

Produkt ten nadaje się wyłącznie do stosowania w hodowli komórkowej in vitro i nie może być bezpośrednio stosowany w leczeniu klinicznym.