Zestaw do hodowli komórek AMMS®NK 3.0

Terapia komórkami NK (Natural Killer) stała się kluczowym obszarem badań w immunoterapii, wykazując niezwykły potencjał w onkologii. Komórki NK to wrodzone limfocyty o szerokim spektrum aktywności cytotoksycznej, zdolne do atakowania komórek nowotworowych, komórek zakażonych wirusem i innych jednostek patologicznych. W odróżnieniu od konwencjonalnych terapii komórkami T, komórki NK wywierają natychmiastowe działanie cytotoksyczne bez wcześniejszego przygotowania antygenem, umożliwiając szybkie działanie terapeutyczne niezależnie od specyficzności antygenu nowotworowego.

Rycina 1. Mechanizmy przeciwnowotworowe komórek NK
(Źródło obrazu: Acta Pharmaceutica Sinica)

Komórki NK mogą pochodzić z różnych źródeł, w tym z krwi obwodowej, krwi pępowinowej (UCB), indukowanych pluripotentnych komórek macierzystych (iPSC) i linii komórkowej NK92. Badania podkreślają, że komórki NK pochodzące z UCB i progenitory wykazują największą liczebność wśród dostępnych źródeł. Naiwny fenotyp komórek NK pochodzących z UCB zmniejsza ryzyko choroby przeszczep przeciwko gospodarzowi (GVHD), podczas gdy ich szeroka dostępność i wyższa zdolność proliferacyjna pozycjonują UCB jako strategiczne źródło do produkcji komórek NK. Co godne uwagi, pierwsze badanie kliniczne CAR-NK wykorzystało komórki NK pochodzące z UCB. Rosnąca popularność komórek UCB-NK w badaniach nad immunoterapią podkreśla krytyczne wyzwanie osiągnięcia skalowalnej, wysoce czystej ekspansji komórek NKin vitrodo zastosowań klinicznych.

Zestaw do hodowli komórek AMMS®NK 3.0 jest przeznaczony do: na żywoaktywacja i ekspansja komórek NK o wysokiej czystości ze świeżych lub kriokonserwowanych komórek jednojądrowych krwi pępowinowej (CBMC). 2-litrowy system hodowlany osiąga wydajność 4-6 miliardów komórek o czystości NK przekraczającej 90%.

​​Główne cechy​​

• ​​Kultura zdefiniowana chemicznie​​
  ​​
• Zgodność próbki: Świeże lub kriokonserwowane UCB CBMC​​
  ​
• Formuła wolna od ksenobiotyków​​
  ​
• Ekspansja o wysokiej wydajności: 4–6 miliardów komórek na system 2L o czystości NK >90%​

Dane dotyczące wydajności​

​
Rycina 1. Całkowita ekspansja komórkowa i żywotność komórek NK pochodzących z UCB hodowanych przy użyciu zestawu AMMS®NK Cell Culture Kit 3.0

​
Rysunek 2. Procent populacji komórek CD3-CD56+ w komórkach NK pochodzących z UCB hodowanych przy użyciu zestawu AMMS®NK Cell Culture Kit 3.0​​

Środki ostrożności
1. Wymagania dotyczące próbek:
① Jeśli objętość krwi pępowinowej (wliczając antykoagulant) jest mniejsza niż 80 ml lub oczekiwany zbiór NK jest większy, zaleca się użycie HPL zamiast osocza autologicznego. Szybkość proliferacji komórek HPL jest około 1-2 razy wyższa niż w przypadku osocza autologicznego.
② Zabieg powinien zostać wykonany w ciągu 12 godzin od pobrania krwi.
③ Zaleca się, aby gęstość zamrażania zamrożonych próbek wynosiła 2-4 x 10 7/ml, a wskaźnik przeżywalności po odzyskaniu nie był niższy niż 80%. Podczas hodowli próbek krwi pępowinowej należy stosować HPL zamiast osocza autologicznego. Do próbek krwi obwodowej należy stosować osocze autologiczne (antykoagulant heparyna sodowa), a HPL można również stosować zamiast osocza autologicznego. 2. Gęstość naczyń: zaleca się, aby początkowa gęstość komórek w butelce wynosiła 1x10 6 komórek/ml. Gdy jest więcej czerwonych krwinek, należy wybrać zliczanie fluorescencji lub zliczanie lizy czerwonych krwinek, aby uniknąć wpływu na gęstość komórek w butelce.
3. Gęstość płynu: gęstość po zastąpieniu płynu nie powinna być niższa niż 1x10 6/ml.
4. Zastosowanie pożywki:
① Przed każdą infuzją podłoże hodowlane należy naturalnie ogrzać do temperatury pokojowej.
② Nie umieszczaj całej butelki z podłożem hodowlanym w inkubatorze o temperaturze 37°C w celu jego ponownego ogrzania, w przeciwnym razie przyspieszy to inaktywację cytokin w uzupełnionym podłożu hodowlanym.
Odczynnik CGT klasy GMP
③ Przygotowane kompletne medium ma krótki termin przydatności, zaleca się jego zużycie w ciągu około tygodnia.
5、Prawidłowe obchodzenie się z osoczem i jego konserwacja: szczegółowe informacje znajdują się w instrukcji. Odwirowana osocze powinno być klarowne.
6、Używanie worków hodowlanych: Gdy objętość hodowli jest mniejsza niż 1L, worki hodowlane muszą zostać złożone przed umieszczeniem. Zaleca się używanie zalecanego modelu naszej firmy.
7. Czas inkubacji: A, czynnik należy inkubować w temperaturze 4 ℃ przez noc na płaskim łóżku. (W nagłych przypadkach należy spróbować inkubować w temperaturze 37 ℃ przez 2 godziny)
8. Nie potrząsaj butelką hodowlaną bez powodu na początkowym etapie hodowli: w przeciwnym razie grupa aktywowanych klonów łatwo wypłynie na powierzchnię, a czynnik powlekający zmniejszy aktywację grupy komórek.
9、Użycie czynników: Aby zmniejszyć utratę czynników zawieszonych na ścianie, zaleca się przeprowadzenie wirowania przed użyciem. Umieść fiolkę zawierającą czynniki w 50 ml probówce wirówkowej i wiruj przy 1000 obr./min przez 1-2 min.
10. Konserwacja sprzętu: regularnie sprawdzaj temperaturę i stężenie CO2 w inkubatorze i wymieniaj filtr na czas. Regularna konserwacja i czyszczenie szafy bezpieczeństwa biologicznego.
11. Monitorowanie środowiska: regularnie wymieniaj filtry główne, średnio- i wysokowydajne, aby zapewnić utrzymanie standardów środowiskowych w czystych obszarach.
12. Stałe typy i modele materiałów eksploatacyjnych do eksperymentów: należy z góry ocenić wpływ zmieniających się modeli i specyfikacji na efekty uprawy, np. butelki do hodowli o powierzchni 75 cm2 i worki do hodowli komórkowej.