Gatunki reaktywne:Człowiek
Endotoksyna:
Wygląd:Brązowa ciecz
Odczynnik ActCel T Cell Activation Reagent syntetyzuje się poprzez sprzężenie nanomacierzy z przeciwciałem anty-ludzkim CD3 i przeciwciałem anty-ludzkim CD28. Może on delikatnie i skutecznie aktywować limfocyty T lub PBMC (jednojądrowe komórki krwi obwodowej).
Procedury eksperymentalne:
1.1 Przeprowadzić eksperyment przy mianie 1:200. Konkretne ilości dodatków podano w poniższej tabeli:
| Płytka kulturowa | Maksymalna objętość kultury | Całkowita liczba komórek T | Objętość odczynnika aktywującego komórki T dodana do każdego dołka |
| 96-dołkowy | 0,2 ml | 0,3×10⁶ | 1 μl |
| 48-dołkowy | 1 ml | 1×10⁶ | 5 μl |
| 24-dołkowy | 2 ml | 2×10⁶ | 10 μl |
| 12-dołkowy | 4 ml | 4×10⁶ | 20 μl |
| 6-dołkowy | 5 ml | 5×10⁶ | 25 μl |
1.2 Biorąc za przykład 1×10⁶ komórek T: Dodaj 995 μl podłoża X-VIVOTM 15 i 5 μl odczynnika aktywującego komórki T (zawierającego 200 IU/ml IL-2) do 1×10⁶ komórek T. Następnie hoduj je w temperaturze 37 °C i 5% CO₂ przez 2 dni.
1.3 Po hodowli przez 2-3 dni odwirować przy 300 g przez 10 minut, usunąć supernatant i dodać 2 ml świeżego, kompletnego medium, aby usunąć odczynnik aktywacji komórek T. Następnie kontynuować hodowlę w temperaturze 37 °C w atmosferze 5% CO₂.
1.4 Co 2 dni dokładnie pipetuj zawiesinę komórek, aby równomiernie wymieszać, dodaj 2-krotność objętości świeżego kompletnego medium (stosunek objętości oryginalnej do objętości uzupełniającej wynosi 1:2) i policz komórki, aby obliczyć współczynnik amplifikacji. Następnie hoduj je w inkubatorze w temperaturze 37 °C, 5% CO₂. Na przykład, jeśli medium zostanie uzupełnione 4 dnia, a objętość oryginalna wynosi 2 ml, należy dodać 4 ml medium, a całkowita objętość końcowa wyniesie 6 ml.
- Podczas inkubacji odczynnika aktywującego limfocyty T z komórkami, konieczne jest ich dokładne wymieszanie w celu zwiększenia skuteczności aktywacji.
- Miano odczynnika aktywującego limfocyty T można regulować w zakresie 1:100 - 300.
- Czas wirowania mający na celu usunięcie odczynnika aktywującego limfocyty T można zoptymalizować zgodnie z wymaganiami klienta.
Produkt ten nadaje się wyłącznie do stosowania w hodowli komórkowej in vitro i nie może być bezpośrednio stosowany w leczeniu klinicznym.