MaxSortin® CD4-isolatiekit

De MaxSortin® CD4-scheidingskit kan worden gebruikt om menselijke CD4+ T-cellen te sorteren. Door nanoschaal CD4-scheidingsmagneetkorrels met cellen te incuberen, kunnen CD4+ T-cellen worden gesorteerd. De nanoschaal CD4-scheidingsmagneetkorrels worden geïncubeerd met mononucleaire cellen uit perifeer bloed (PBMC's) en vervolgens onderworpen aan magnetische scheiding. Dit maakt de scheiding en verrijking van CD4+ T-cellen mogelijk, speelt een rol bij de zuivering van CD4+ T-cellen en is toepasbaar bij de productie van celtherapieproducten.

1. Resuspendeer humane PBMC's in PBS-buffer met 1% humaan serumalbumine (HSA). Neem een ​​monster om te tellen en breng 1×10⁷ cellen over in een 1,5 ml EP-buis. Centrifugeer vervolgens 5 minuten bij 1500 tpm.
2. Gooi de supernatant weg, neem 80 μL MaxSortin® Cell Sorting Buffer om de cellen te resuspenderen, voeg 20 μL CD4 scheidingsmagnetische kralen toe, meng goed en plaats de cellen vervolgens in een koelkast bij 2 - 8 °C voor incubatie gedurende 15 minuten.
3. Neem de MaxSortin® L-scheidingskolom en plaats deze op de magnetisch geactiveerde celsorterings (MACS) sorteerder. Spoel de kolom tweemaal met 1 ml MaxSortin® celsorteringsbuffer.
4. Haal het monster dat de incubatie heeft voltooid uit de koelkast bij 2-8 °C, voeg 1 ml MACS-oplossing toe, centrifugeer gedurende 5 minuten bij 1500 rpm en gooi de supernatant weg.
5. Voeg 1 ml MaxSortin® celsorteringsbuffer toe om de cellen te resuspenderen en voeg het monster toe aan de scheidingskolom. Voeg, nadat het monster op natuurlijke wijze is uitgelopen, MaxSortin® celsorteringsbuffer in twee porties toe, telkens 1 ml. Vang het effluent op in een centrifugebuis van 15 ml.
6. Nadat alle MaxSortin® Cell Sorting Buffer is weggestroomd, verwijdert u de scheidingskolom uit de MACS-sorteerder en plaatst u deze in een nieuwe centrifugebuis van 15 ml. Voeg 3 ml MaxSortin® Cell Sorting Buffer toe aan de scheidingskolom en gebruik de zuiger die bij de scheidingskolom wordt geleverd om de vloeistof er direct uit te duwen.
7. Plaats de 15 ml centrifugebuis met de verzamelde vloeistof in een horizontale centrifuge en centrifugeer gedurende 5 minuten bij 1500 toeren per minuut.
8. Giet na het centrifugeren de supernatant af, neem 1 ml 1× Dulbecco's fosfaatgebufferde zoutoplossing (DPBS) om de cellen te resuspenderen, tel de cellen en voer flowcytometriedetectie uit.