मॅक्ससोर्टिन® सीडी४ आयसोलेशन किट

मॅक्ससोर्टिन® सीडी४ सेपरेशन किट मानवी सीडी४+ टी पेशींचे वर्गीकरण करण्यासाठी वापरले जाऊ शकते. पेशींसह नॅनोस्केल सीडी४ सेपरेशन मॅग्नेटिक बीड्सचे उष्मायन करून, सीडी४+ टी पेशींचे वर्गीकरण साध्य करता येते. नॅनोस्केल सीडी४ सेपरेशन मॅग्नेटिक बीड्स पेरिफेरल ब्लड मोनोन्यूक्लियर सेल्स (पीबीएमसी) सह उष्मायन केले जातात आणि नंतर त्यांना चुंबकीय पृथक्करण केले जाते, जे सीडी४+ टी पेशींचे पृथक्करण आणि समृद्धीकरण सक्षम करते, सीडी४+ टी पेशी शुद्ध करण्यात भूमिका बजावते आणि सेल थेरपी उत्पादनांच्या उत्पादनासाठी लागू होते.

१. १% मानवी सीरम अल्ब्युमिन (HSA) असलेल्या PBS बफरमध्ये मानवी PBMCs पुन्हा सस्पेंशन करा. मोजणीसाठी नमुना घ्या आणि १×१०⁷ पेशी १.५ मिली EP ट्यूबमध्ये स्थानांतरित करा. नंतर १५०० rpm वर ५ मिनिटांसाठी सेंट्रीफ्यूज करा.
२. सुपरनॅटंट टाकून द्या, पेशींना पुन्हा सस्पेंड करण्यासाठी ८० μL MaxSortin® सेल सॉर्टिंग बफर घ्या, २० μL CD4 सेपरेशन मॅग्नेटिक बीड्स घाला, चांगले मिसळा आणि नंतर त्यांना रेफ्रिजरेटरमध्ये २ - ८ °C तापमानावर १५ मिनिटे उष्मायनासाठी ठेवा.
३. मॅक्ससोर्टिन® एल-सेपरेशन कॉलम घ्या आणि तो मॅग्नेटिक-अ‍ॅक्टिव्हेटेड सेल सॉर्टिंग (MACS) सॉर्टरवर ठेवा आणि १ मिली मॅक्ससोर्टिन® सेल सॉर्टिंग बफरने दोनदा स्वच्छ धुवा.
४. २ - ८ डिग्री सेल्सिअस तापमानात रेफ्रिजरेटरमधून उष्मायन पूर्ण झालेला नमुना बाहेर काढा, त्यात १ मिली MACS द्रावण घाला, १५०० आरपीएमवर ५ मिनिटांसाठी सेंट्रीफ्यूज करा आणि सुपरनॅटंट टाकून द्या.
५. पेशींना पुन्हा सस्पेंड करण्यासाठी १ मिली मॅक्ससोर्टिन® सेल सॉर्टिंग बफर घाला, नमुना सेपरेशन कॉलममध्ये घाला. तो नैसर्गिकरित्या बाहेर पडल्यानंतर, मॅक्ससोर्टिन® सेल सॉर्टिंग बफर दोन भागांमध्ये घाला, प्रत्येक वेळी १ मिली. १५ मिली सेंट्रीफ्यूज ट्यूबमध्ये सांडपाणी गोळा करा.
६. सर्व मॅक्ससोर्टिन® सेल सॉर्टिंग बफर बाहेर पडल्यानंतर, MACS सॉर्टरमधून सेपरेशन कॉलम काढा आणि तो दुसऱ्या नवीन १५ मिली सेंट्रीफ्यूज ट्यूबमध्ये ठेवा. सेपरेशन कॉलममध्ये ३ मिली मॅक्ससोर्टिन® सेल सॉर्टिंग बफर घाला आणि सेपरेशन कॉलमसोबत येणाऱ्या पिस्टनचा वापर करून द्रव थेट बाहेर ढकलून द्या.
७. गोळा केलेले द्रव असलेली १५ मिली सेंट्रीफ्यूज ट्यूब एका आडव्या सेंट्रीफ्यूजमध्ये ठेवा आणि सेंट्रीफ्यूज १५०० आरपीएमवर ५ मिनिटांसाठी ठेवा.
८. सेंट्रीफ्यूगेशननंतर, सुपरनॅटंट बाहेर टाका, पेशींना पुन्हा सस्पेंड करण्यासाठी, पेशींची गणना करण्यासाठी आणि फ्लो सायटोमेट्री डिटेक्शन करण्यासाठी १ मिली १× डल्बेको फॉस्फेट-बफर्ड सलाईन (DPBS) द्रावण घ्या.