MaxSortin® CD4 тусгаарлах хэрэгсэл

MaxSortin® CD4 Separation Kit нь хүний ​​CD4+ Т эсийг ангилахад ашиглаж болно. Нано хэмжээст CD4 ялгах соронзон бөмбөлгүүдийг эсүүдээр өсгөвөрлүүлснээр CD4+ Т эсийг ангилах боломжтой. Нано хэмжээст CD4 тусгаарлах соронзон бөмбөлгүүдийг захын цусны мононуклеар эсүүд (PBMCs) -аар өсгөвөрлөж, дараа нь соронзон тусгаарлалтанд оруулдаг бөгөөд энэ нь CD4+ T эсийг ялган баяжуулж, CD4+ Т эсийг цэвэршүүлэх үүрэг гүйцэтгэдэг бөгөөд эсийн эмчилгээний бүтээгдэхүүн үйлдвэрлэхэд тохиромжтой.

1. Хүний цусны ийлдэс альбумин (HSA) агуулсан PBS буферт хүний ​​PBMC-ийг дахин түдгэлзүүлнэ. Тоолох дээж авч 1×10⁷ эсийг 1.5 мл EP хоолой руу шилжүүлнэ. Дараа нь 5 минутын турш 1500 эрг / мин-д центрифуг хийнэ.
2. Супернатантыг хаяж, эсүүдийг дахин түдгэлзүүлэхийн тулд 80 мкл MaxSortin® Cell Sorting Buffer авч, 20 мкл CD4 тусгаарлах соронзон бөмбөлгүүдийг нэмж, сайтар хольж, дараа нь 2 - 8 ° C-т хөргөгчинд хийж 15 минутын турш инкубацид хийнэ.
3. MaxSortin® L-Separation Column-ийг аваад соронзон идэвхжүүлсэн эс ялгах (MACS) ангилагч дээр байрлуулж, 1 мл MaxSortin® Cell Sorting Buffer-ээр хоёр удаа зайлж угаана.
4. Инкубаци дууссан дээжийг хөргөгчнөөс 2 - 8 0С-т авч, 1 мл MACS уусмал нэмж, 1500 rpm-т 5 минутын турш центрифуг хийж, дээд давхаргыг устгана.
5. Эсүүдийг дахин түдгэлзүүлэхийн тулд 1 мл MaxSortin® Cell Sorting Buffer нэмж, дээжийг тусгаарлах баганад нэмнэ. Энэ нь байгалийн жамаар гадагшилсны дараа MaxSortin® Cell Sorting Buffer-ийг 2 хэсэгт 1 мл болгон нэмнэ. Бохир усыг 15 мл центрифугийн хоолойд цуглуулна.
6. Бүх MaxSortin® Cell Sorting Buffer урсаж дууссаны дараа тусгаарлах баганыг MACS ангилагчаас салгаж, өөр шинэ 15 мл центрифугийн хоолойд хийнэ. Салах баганад 3 мл MaxSortin® Cell Sorting Buffer нэмж, ялгах баганатай хамт ирдэг поршений тусламжтайгаар шингэнийг шууд гадагшлуулна.
7. Цуглуулсан шингэнийг агуулсан 15 мл центрифугийн хоолойг хэвтээ центрифугт хийж 1500 эрг/мин-д 5 минутын турш центрифуг хийнэ.
8. Центрифуг хийсний дараа дээд давхаргыг асгаж, 1 мл 1 × Дулбеккогийн фосфат буфержүүлсэн давсны уусмал (DPBS) авч эсийг дахин түдгэлзүүлж, эсийг тоолж, урсгалын цитометрийн илрүүлэлт хийнэ.