MaxSortin® CD4 izolācijas komplekts

MaxSortin® CD4 atdalīšanas komplektu var izmantot cilvēka CD4+ T šūnu šķirošanai. CD4+ T šūnu šķirošanu var panākt, inkubējot nanoskalas CD4 atdalīšanas magnētiskās lodītes ar šūnām. Nanoskalas CD4 atdalīšanas magnētiskās lodītes tiek inkubētas ar perifēro asiņu mononukleārajām šūnām (PBMC) un pēc tam pakļautas magnētiskai atdalīšanai, kas ļauj atdalīt un bagātināt CD4+ T šūnas, tādējādi veicinot CD4+ T šūnu attīrīšanu un izmantojot to šūnu terapijas produktu ražošanā.

1. Resuspendējiet cilvēka PBMC PBS buferšķīdumā, kas satur 1% cilvēka seruma albumīna (HSA). Paņemiet paraugu skaitīšanai un pārvietojiet 1×10⁷ šūnas 1,5 ml EP mēģenē. Pēc tam centrifugējiet ar ātrumu 1500 apgr./min 5 minūtes.
2. Izmetiet supernatantu, paņemiet 80 μL MaxSortin® šūnu šķirošanas buferšķīduma, lai atkārtoti suspendētu šūnas, pievienojiet 20 μL CD4 atdalīšanas magnētisko lodīšu, labi samaisiet un pēc tam ievietojiet tās ledusskapī 2–8 °C temperatūrā inkubācijai uz 15 minūtēm.
3. Paņemiet MaxSortin® L-atdalīšanas kolonnu, novietojiet to uz magnētiski aktivētā šūnu šķirošanas (MACS) šķirotāja un divas reizes noskalojiet ar 1 ml MaxSortin® šūnu šķirošanas buferšķīduma.
4. Izņemiet paraugu, kas ir pilnībā inkubēts, no ledusskapja 2–8 °C temperatūrā, pievienojiet 1 ml MACS šķīduma, centrifugējiet ar ātrumu 1500 apgr./min 5 minūtes un izlejiet supernatantu.
5. Pievienojiet 1 ml MaxSortin® šūnu šķirošanas buferšķīduma, lai atkārtoti suspendētu šūnas, pievienojiet paraugu atdalīšanas kolonnā. Pēc tam, kad tas dabiski izplūst, pievienojiet MaxSortin® šūnu šķirošanas buferšķīdumu divās porcijās, katrā reizē pa 1 ml. Savāciet notekūdeņus 15 ml centrifūgas mēģenē.
6. Pēc tam, kad viss MaxSortin® šūnu šķirošanas buferšķīdums ir iztecējis, izņemiet atdalīšanas kolonnu no MACS šķirotāja un ievietojiet to citā jaunā 15 ml centrifūgas mēģenē. Pievienojiet atdalīšanas kolonnā 3 ml MaxSortin® šūnu šķirošanas buferšķīduma un izmantojiet virzuli, kas nāk komplektā ar atdalīšanas kolonnu, lai tieši izspiestu šķidrumu.
7. Ievietojiet 15 ml centrifūgas mēģeni ar savākto šķidrumu horizontālā centrifūgā un centrifugējiet ar ātrumu 1500 apgr./min 5 minūtes.
8. Pēc centrifugēšanas izlejiet supernatantu, paņemiet 1 ml 1× Dulbeko fosfātu buferētā fizioloģiskā šķīduma (DPBS), lai atkārtoti suspendētu šūnas, saskaitiet šūnas un veiciet plūsmas citometrijas noteikšanu.