AMMS®NK Cell Culture Kit 3.0
ຫຼັກຊັບ: ໃນຫຼັກຊັບ
ຮຸ່ນ: AS-25
ຜະລິດຕະພັນນີ້ແມ່ນເຫມາະສົມສໍາລັບເລືອດສົດຫຼື cryopreserved peripheral PBMC ແລະ CBMC ເລືອດສາຍບື, ແລະຈຸລັງ NK ທີ່ມີຄວາມບໍລິສຸດສູງແມ່ນໄດ້ຮັບໂດຍການກະຕຸ້ນແລະການຂະຫຍາຍຢູ່ໃນ vitro. ມັນແມ່ນພຽງແຕ່ສໍາລັບການນໍາໃຊ້ການຄົ້ນຄວ້າ invitro.
ການປິ່ນປົວດ້ວຍເຊນ Killer ທໍາມະຊາດ (NK) ໄດ້ກາຍເປັນຈຸດສຸມການຄົ້ນຄວ້າທີ່ສໍາຄັນໃນການປິ່ນປົວດ້ວຍພູມຕ້ານທານ, ສະແດງໃຫ້ເຫັນທ່າແຮງທີ່ໂດດເດັ່ນໃນ oncology. ຈຸລັງ NK ແມ່ນ lymphocytes innate ມີກິດຈະກໍາ cytotoxic spectrum ກວ້າງ, ສາມາດກໍານົດເປົ້າຫມາຍຂອງຈຸລັງ tumor, ຈຸລັງທີ່ຕິດເຊື້ອໄວຣັດ, ແລະຫນ່ວຍງານທາງພະຍາດອື່ນໆ. ແຕກຕ່າງຈາກການປິ່ນປົວ T cell ແບບດັ້ງເດີມ, ຈຸລັງ NK ສົ່ງຜົນກະທົບ cytotoxic ທັນທີໂດຍບໍ່ມີການ primeing antigen ກ່ອນ, ເຮັດໃຫ້ການປະຕິບັດການປິ່ນປົວຢ່າງໄວວາທີ່ບໍ່ຂຶ້ນກັບຄວາມສະເພາະຂອງ tumor antigen.
ຮູບທີ່ 1. ກົນໄກຕ້ານ tumor ຂອງ NK Cells
(ແຫຼ່ງຮູບພາບ: Acta Pharmaceutica Sinica)
ຈຸລັງ NK ສາມາດມາຈາກແຫຼ່ງກໍາເນີດທີ່ຫຼາກຫຼາຍ, ລວມທັງເລືອດຂ້າງຄຽງ, ເລືອດສາຍບື (UCB), ຈຸລັງລໍາຕົ້ນຂອງ pluripotent induced (iPSCs), ແລະສາຍຈຸລັງ NK92. ການສຶກສາຊີ້ໃຫ້ເຫັນເຖິງຈຸລັງ NK ແລະ progenitors ທີ່ມາຈາກ UCB ສະແດງໃຫ້ເຫັນຄວາມອຸດົມສົມບູນສູງສຸດໃນບັນດາແຫຼ່ງທີ່ມີຢູ່. phenotype naïve ຂອງຈຸລັງ NK ທີ່ມາຈາກ UCB ຫຼຸດຜ່ອນຄວາມສ່ຽງຕໍ່ Graft-versus-Host Disease (GVHD), ໃນຂະນະທີ່ຄວາມພ້ອມຢ່າງກວ້າງຂວາງຂອງພວກເຂົາແລະຕໍາແຫນ່ງຄວາມສາມາດຂະຫຍາຍພັນທີ່ເຫນືອກວ່າ UCB ເປັນແຫຼ່ງຍຸດທະສາດສໍາລັບການຜະລິດຈຸລັງ NK. ເປັນທີ່ໜ້າສັງເກດ, ການທົດລອງທາງຄລີນິກ CAR-NK ທຳອິດໄດ້ນຳໃຊ້ຈຸລັງ NK ທີ່ມາຈາກ UCB. ການຂະຫຍາຍຕົວທີ່ໂດດເດັ່ນຂອງຈຸລັງ UCB-NK ໃນການຄົ້ນຄວ້າທາງດ້ານພູມຄຸ້ມກັນໄດ້ຊີ້ໃຫ້ເຫັນເຖິງສິ່ງທ້າທາຍທີ່ສໍາຄັນຂອງການບັນລຸການຂະຫຍາຍຈຸລັງ NK ທີ່ມີຄວາມບໍລິສຸດສູງທີ່ສາມາດຂະຫຍາຍໄດ້.ໃນ vitroສໍາລັບການແປພາສາທາງດ້ານການຊ່ວຍ.
ຊຸດວັດທະນະທໍາ AMMS®NK Cell 3.0 ຖືກອອກແບບມາສໍາລັບ ex vivoການກະຕຸ້ນແລະການຂະຫຍາຍຈຸລັງ NK ທີ່ມີຄວາມບໍລິສຸດສູງຈາກຈຸລັງສາຍບືຂອງສາຍບືສົດຫຼື cryopreserved mononuclear (CBMCs). ລະບົບວັດທະນະທໍາ 2 ລິດບັນລຸຜົນຜະລິດຂອງ 4-6 ຕື້ຈຸລັງທີ່ມີຄວາມບໍລິສຸດ NK ເກີນ 90%.
ຄຸນນະສົມບັດທີ່ສໍາຄັນ
- ວັດທະນະທໍາທີ່ກໍານົດທາງເຄມີ
- ຄວາມເຂົ້າກັນໄດ້ຂອງຕົວຢ່າງ: UCB CBMCs ສົດຫຼືເກັບຮັກສາໄວ້ cryopreserved
- ສູດຟຣີ Xeno
- ການຂະຫຍາຍຜົນຜະລິດສູງ: 4-6 ຕື້ຈຸລັງຕໍ່ລະບົບ 2L ທີ່ມີຄວາມບໍລິສຸດ > 90% NK
ຂໍ້ມູນການປະຕິບັດ
ຮູບ 1. ການຂະຫຍາຍເຊນທັງໝົດ ແລະຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງເຊລ NK ທີ່ມາຈາກ UCB ທີ່ລ້ຽງດ້ວຍ AMMS®NK Cell Culture Kit 3.0
ຮູບ 2. ເປີເຊັນປະຊາກອນເຊນ CD3-CD56+ ໃນຈຸລັງ NK ທີ່ມາຈາກ UCB ທີ່ລ້ຽງດ້ວຍ AMMS®NK Cell Culture Kit 3.0
ການປ້ອງກັນລ່ວງໜ້າ
1, ຂໍ້ກໍານົດຕົວຢ່າງ:
① ຖ້າປະລິມານເລືອດຂອງເລືອດສາຍບື (ລວມທັງສານຕ້ານການ coagulant) ໜ້ອຍກວ່າ 80mL ຫຼືການເກັບກ່ຽວ NK ທີ່ຄາດໄວ້ຈະຫຼາຍ, ແນະນຳໃຫ້ໃຊ້ HPL ແທນ autologous plasma. ອັດຕາການຂະຫຍາຍຈຸລັງຂອງ HPL ແມ່ນສູງກວ່າ plasma autologous ປະມານ 1-2 ເທົ່າ.
② ການຜ່າຕັດຄວນຈະສໍາເລັດພາຍໃນ 12 ຊົ່ວໂມງຫຼັງຈາກການເກັບເລືອດ.
③ ແນະນໍາໃຫ້ຄວາມຫນາແຫນ້ນຂອງ freezing ຂອງຕົວຢ່າງ frozen ແມ່ນ 2-4 x 10 7 / mL, ແລະອັດຕາການມີຊີວິດຫຼັງຈາກການຟື້ນຕົວບໍ່ຄວນຕ່ໍາກວ່າ 80%. HPL ຄວນຖືກໃຊ້ແທນ autologous plasma ໃນລະຫວ່າງການປູກຕົວຢ່າງເລືອດສາຍບື. ຄວນໃຊ້ autologous plasma ສໍາລັບການເກັບຕົວຢ່າງເລືອດຂ້າງຄຽງ (heparin sodium anticoagulant), ແລະ HPL ຍັງສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ແທນ autologous plasma.2, ຄວາມຫນາແຫນ້ນຂອງເຮືອ: ຄວາມຫນາແຫນ້ນຂອງຈຸລັງເບື້ອງຕົ້ນຂອງຂວດແມ່ນແນະນໍາໃຫ້ 1x10 6 ຈຸລັງ / ມລ. ເມື່ອມີເມັດເລືອດແດງຫຼາຍ, ການນັບ fluorescence ຫຼືການນັບເມັດເລືອດແດງຄວນໄດ້ຮັບການຄັດເລືອກເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການຜົນກະທົບຕໍ່ຄວາມຫນາແຫນ້ນຂອງຂວດຂອງຈຸລັງ.
3, ຄວາມຫນາແຫນ້ນຂອງນ້ໍາ: ຄວາມຫນາແຫນ້ນຫຼັງຈາກການທົດແທນນ້ໍາບໍ່ຄວນຕ່ໍາກ່ວາ 1x10 6 / mL.
4, ການນໍາໃຊ້ສື່ສານວັດທະນະທໍາ:
① ເຄື່ອງປູກຝັງຄວນໄດ້ຮັບການອົບອຸ່ນຕາມທໍາມະຊາດໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງກ່ອນທີ່ຈະ້ໍາຕົ້ມແຕ່ລະຄົນ.
② ຫ້າມເອົາຂວດທັງໝົດຂອງວັດທະນະທ ໍາໃສ່ໃນຕູ້ອົບ 37 ℃ເພື່ອໃຫ້ອຸນຫະພູມຄືນໃໝ່, ຖ້າບໍ່ດັ່ງນັ້ນມັນຈະເລັ່ງການບໍ່ເຄື່ອນໄຫວຂອງ cytokines ໃນຕົວບັນຈຸອາຫານເສີມ.
GMP ເກຣດ CGT Reagent
③ ຂະຫນາດກາງທີ່ກຽມໄວ້ຄົບຖ້ວນສົມບູນມີອາຍຸການເກັບຮັກສາສັ້ນ, ແລະແນະນໍາໃຫ້ໃຊ້ມັນຫມົດໃນປະມານຫນຶ່ງອາທິດ.
5, ການຈັດການທີ່ເຫມາະສົມແລະປົກປັກຮັກສາ plasma: ເບິ່ງຄໍາແນະນໍາສໍາລັບລາຍລະອຽດ. plasma centrifuged ຄວນຈະແຈ້ງ.
6, ການນໍາໃຊ້ຖົງວັດທະນະທໍາ: ເມື່ອປະລິມານການວັດທະນະທໍາແມ່ນຫນ້ອຍກ່ວາ 1L, ຖົງວັດທະນະທໍາຈໍາເປັນຕ້ອງໄດ້ຖືກພັບກ່ອນທີ່ຈະຖືກຈັດໃສ່. ມັນແນະນໍາໃຫ້ໃຊ້ຮູບແບບທີ່ແນະນໍາຂອງບໍລິສັດຂອງພວກເຮົາ.
7 、 ເວລາ Incubation: A, ປັດໄຈທີ່ຄວນຈະໄດ້ຮັບການ incubated 4 ℃ overnight ໃນຕຽງນອນແປ. (ໃນກໍລະນີສຸກເສີນ, ໃຫ້ພະຍາຍາມ incubate 37°C ສໍາລັບ 2 ຊົ່ວໂມງ)
8, ຢ່າສັ່ນແກ້ວວັດທະນະ ທຳ ຕາມຄວາມຕັ້ງໃຈໃນໄລຍະເລີ່ມຕົ້ນຂອງວັດທະນະ ທຳ: ຖ້າບໍ່ດັ່ງນັ້ນ, ກຸ່ມ activatedclone ງ່າຍທີ່ຈະລອຍຂຶ້ນ, ແລະປັດໃຈການເຄືອບຈະຫຼຸດຜ່ອນການກະຕຸ້ນຂອງກຸ່ມເຊນ.
9, ການນໍາໃຊ້ປັດໄຈ: ເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນການສູນເສຍປັດໄຈທີ່ຫ້ອຍຢູ່ໃນຝາ, ມັນແມ່ນແນະນໍາໃຫ້ປະຕິບັດການcentrifugation ກ່ອນທີ່ຈະນໍາໃຊ້. ເອົາປັດໃຈບັນຈຸຂວດເຂົ້າໄປໃນທໍ່ centrifuge 50mL ແລະ centrifuge ຢູ່ທີ່ 1000rpm ສໍາລັບ 1-2 ນາທີ.
10, ການບໍາລຸງຮັກສາອຸປະກອນ: ກວດສອບອຸນຫະພູມແລະຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ CO2 incubator ເປັນປົກກະຕິ, ແລະປ່ຽນການກັ່ນຕອງໃນເວລາ. ການບໍາລຸງຮັກສາເປັນປົກກະຕິແລະການທໍາຄວາມສະອາດຕູ້ຄວາມປອດໄພທາງຊີວະພາບ.
11, ການຕິດຕາມກວດກາສິ່ງແວດລ້ອມ: ທົດແທນການກັ່ນຕອງປະຖົມ, ຂະຫນາດກາງແລະສູງປະສິດທິພາບເປັນປົກກະຕິເພື່ອຮັບປະກັນມາດຕະຖານສິ່ງແວດລ້ອມຂອງພື້ນທີ່ທີ່ສະອາດ.
12 、 ປະເພດຄົງທີ່ ແລະແບບຈໍາລອງຂອງເຄື່ອງບໍລິໂພກໃນການທົດລອງ : ຜົນກະທົບຂອງການປ່ຽນແປງແບບຈໍາລອງ ແລະຂໍ້ກໍາຫນົດກ່ຽວກັບຜົນກະທົບຂອງການປູກຝັງຄວນໄດ້ຮັບການປະເມີນລ່ວງຫນ້າ, ເຊັ່ນ: ແກ້ວວັດທະນະທໍາ 75cm2 ແລະຖົງວັດທະນະທໍາຈຸລັງ.