MaxSortin® CD4分離キット

MaxSortin® CD4分離キットは、ヒトCD4+ T細胞の選別に使用できます。ナノスケールCD4分離磁性ビーズを細胞とインキュベートすることで、CD4+ T細胞の選別が可能になります。ナノスケールCD4分離磁性ビーズを末梢血単核細胞（PBMC）とインキュベートし、磁気分離を行うことで、CD4+ T細胞の分離・濃縮が可能となり、CD4+ T細胞の精製に役立つだけでなく、細胞治療製品の製造にも応用可能です。

1. ヒトPBMCを1%ヒト血清アルブミン（HSA）を含むPBS緩衝液に再懸濁する。計数用サンプルを採取し、1×10⁷個の細胞を1.5 mL EPチューブに移す。1500 rpmで5分間遠心分離する。
2. 上清を捨て、MaxSortin® Cell Sorting Buffer 80 μL を取り細胞を再懸濁し、CD4 分離磁気ビーズ 20 μL を加えてよく混ぜ、冷蔵庫で 2 - 8 °C で 15 分間インキュベートします。
3. MaxSortin® L-Separation Column を磁気活性化細胞選別 (MACS) ソーターに設置し、1 mL の MaxSortin® Cell Sorting Buffer で 2 回すすいでください。
4. 2～8℃の冷蔵庫から培養を終えたサンプルを取り出し、MACS溶液1mLを加え、1500rpmで5分間遠心分離し、上清を捨てます。
5. MaxSortin® Cell Sorting Buffer 1 mLを加えて細胞を再懸濁し、サンプルを分離カラムに添加します。サンプルが自然に流出した後、MaxSortin® Cell Sorting Bufferを1 mLずつ2回に分けて添加します。流出液を15 mL遠心チューブに回収します。
6. MaxSortin® Cell Sorting Bufferがすべて流出したら、分離カラムをMACSソーターから取り外し、別の新しい15 mL遠心チューブにセットします。分離カラムにMaxSortin® Cell Sorting Buffer 3 mLを加え、分離カラムに付属のピストンを使って液体を直接押し出します。
7. 回収した液体が入った15mL遠心管を水平遠心分離機に入れ、1500rpmで5分間遠心分離します。
8. 遠心分離後、上清を捨て、1×ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（DPBS）溶液1mLを取り、細胞を再懸濁し、細胞数を計数してフローサイトメトリー検出を行います。