ערכת בידוד MaxSortin® CD4

ערכת ההפרדה MaxSortin® CD4 יכולה לשמש למיון תאי T אנושיים מסוג CD4+. באמצעות דגירה של חרוזי הפרדה מגנטיים מסוג CD4 בקנה מידה ננומטרי עם תאים, ניתן להשיג מיון של תאי T מסוג CD4+. חרוזי ההפרדה המגנטיים מסוג CD4 בקנה מידה ננומטרי מודגרים עם תאי דם חד-גרעיניים היקפיים (PBMCs) ולאחר מכן עוברים הפרדה מגנטית, המאפשרת הפרדה והעשרה של תאי T מסוג CD4+, וממלאת תפקיד בטיהור תאי T מסוג CD4+ וניתנת ליישום לייצור מוצרי טיפול תאי.

1. יש להשעות מחדש תאי PBMC אנושיים בתמיסת PBS המכילה 1% אלבומין בסרום אנושי (HSA). יש לקחת דגימה לספירה ולהעביר 1×10⁷ תאים למבחנה EP של 1.5 מ"ל. לאחר מכן יש לצנטריפוגה במהירות של 1500 סל"ד למשך 5 דקות.
2. השליכו את הנוזל העל-תכליתי, קחו 80 מיקרוליטר של MaxSortin® Cell Sorting Buffer כדי להשעות מחדש את התאים, הוסיפו 20 מיקרוליטר של חרוזי הפרדה מגנטיים של CD4, ערבבו היטב ולאחר מכן הניחו אותם במקרר בטמפרטורה של 2-8 מעלות צלזיוס לצורך דגירה למשך 15 דקות.
3. קחו את עמודת ההפרדה MaxSortin® L והניחו אותה על ממיין התאים המופעל על ידי מגנטי (MACS), ושטפו אותה פעמיים עם 1 מ"ל של בופר מיון תאים MaxSortin® Cell Sorting Buffer.
4. הוציאו את הדגימה שהשלימה דגירה מהמקרר בטמפרטורה של 2-8 מעלות צלזיוס, הוסיפו 1 מ"ל של תמיסת MACS, בצנטריפוגה ב-1500 סל"ד למשך 5 דקות והשליכו את הנוזל העלוב.
5. הוסיפו 1 מ"ל של MaxSortin® Cell Sorting Buffer כדי להשעות מחדש את התאים, הוסיפו את הדגימה לעמודת ההפרדה. לאחר שהיא זורמת החוצה באופן טבעי, הוסיפו את MaxSortin® Cell Sorting Buffer בשתי מנות, 1 מ"ל בכל פעם. אספו את השפכים לצינור צנטריפוגה של 15 מ"ל.
6. לאחר שכל נוזל מיון התאים MaxSortin® זרם החוצה, הוציאו את עמודת ההפרדה ממיון ה-MACS והניחו אותה במבחנת צנטריפוגה חדשה של 15 מ"ל. הוסיפו 3 מ"ל של נוזל מיון התאים MaxSortin® לעמודת ההפרדה והשתמשו בבוכנה שמגיעה עם עמודת ההפרדה כדי לדחוף את הנוזל החוצה ישירות.
7. הכניסו את צינור הצנטריפוגה של 15 מ"ל המכיל את הנוזל שנאסף לצנטריפוגה אופקית וצנטריפוגה במהירות של 1500 סל"ד למשך 5 דקות.
8. לאחר הצנטריפוגה, שפכו את הנוזל העליוני, קחו 1 מ"ל של תמיסת מלח פוספט בופר דולבקו (DPBS) 1× כדי להשעות מחדש את התאים, ספרו את התאים ובצעו זיהוי ציטומטריית זרימה.