MaxSortin® CD4 izolációs készlet

A MaxSortin® CD4 elválasztó készlet használható emberi CD4+ T-sejtek szétválogatására. A CD4+ T-sejtek szétválogatása nanoskálájú CD4 elválasztó mágneses gyöngyök sejtekkel való inkubálásával érhető el. A nanoskálájú CD4 elválasztó mágneses gyöngyöket perifériás vér mononukleáris sejtjeivel (PBMC-kkel) inkubálják, majd mágneses elválasztásnak vetik alá, ami lehetővé teszi a CD4+ T-sejtek elválasztását és dúsítását, szerepet játszik a CD4+ T-sejtek tisztításában, és alkalmazható sejtterápiás termékek előállítására.

1. Szuszpendálja újra az emberi PBMC-ket 1% humán szérumalbumint (HSA) tartalmazó PBS pufferben. Vegyen mintát a számláláshoz, és helyezzen át 1×10⁷ sejtet egy 1,5 ml-es EP csőbe. Ezután centrifugálja 1500 fordulat/perc sebességgel 5 percig.
2. Öntse ki a felülúszót, vegyen 80 μL MaxSortin® sejtszortírozó puffert a sejtek reszuszpendálásához, adjon hozzá 20 μL CD4 elválasztó mágneses gyöngyöket, keverje jól össze, majd helyezze a keveréket hűtőszekrénybe 2-8 °C-ra 15 percre inkubálásra.
3. Helyezze a MaxSortin® L-elválasztó oszlopot a mágnesesen aktivált sejtválogató (MACS) válogatóra, majd öblítse át kétszer 1 ml MaxSortin® sejtválogató pufferrel.
4. Vegye ki a hűtőszekrényből a 2–8 °C-on inkubált mintát, adjon hozzá 1 ml MACS oldatot, centrifugálja 1500 fordulat/perc sebességgel 5 percig, majd öntse ki a felülúszót.
5. Adjon hozzá 1 ml MaxSortin® sejtszortírozó puffert a sejtek reszuszpendálásához, majd adja hozzá a mintát az elválasztó oszlopba. Miután a minta természetes módon kifolyt, két részletben, alkalmanként 1 ml-rel adagolja hozzá a MaxSortin® sejtszortírozó puffert. Gyűjtse össze az elfolyó folyadékot egy 15 ml-es centrifugacsőbe.
6. Miután a MaxSortin® sejtszortírozó puffer teljes mennyisége kifolyt, vegye ki az elválasztó oszlopot a MACS szortírozóból, és helyezze egy másik, új 15 ml-es centrifugacsőbe. Adjon 3 ml MaxSortin® sejtszortírozó puffert az elválasztó oszlopba, és az elválasztó oszlophoz mellékelt dugattyúval nyomja ki közvetlenül a folyadékot.
7. Helyezze a begyűjtött folyadékot tartalmazó 15 ml-es centrifugacsövet egy vízszintes centrifugába, és centrifugálja 1500 fordulat/perc sebességgel 5 percig.
8. Centrifugálás után öntse le a felülúszót, vegyen 1 ml 1× Dulbecco-féle foszfáttal pufferolt sóoldatot (DPBS) a sejtek újraszuszpendálásához, számlálja meg a sejteket, és végezzen áramlási citometriás detektálást.