Rezime Faktè Pwoteyin ki Enplike nan Kilti Selil Souch Ematopoyetik

Sous: T&L Biotechnology Dat lage: 2023-07-13

Entwodiksyon
Nan dènye ane sa yo, Selil souchYo vin pi plis itilize selil souch nan aplikasyon klinik yo. Sepandan, pwopòsyon ak kantite selil souch nan kò imen an trè ba, sa ki pa ka satisfè bezwen klinik yo. Se poutèt sa, ekspansyon in vitro ak kiltivasyon selil souch yo vin pi enpòtan. Akòz rezon etik ak teknolojik, tretman selil souch yo toujou ap fè fas ak anpil pwoblèm. Makè sifas selil souch/pwogéniteur ematopoyetik yo ak divès liy selil san yo relativman klè, epi karakteristik fenotipik selil yo ka chwazi kantitativman, separe, epi fonksyon yo ka relativman lib, san yo pa bezwen pwosesis konplèks en tankou "echafodaj byolojik" pou transplantasyon nè, vaskilè, ak chirijikal. Se poutèt sa, li se pi bon modèl pou ekspansyon ak diferansyasyon selil souch, epi li pratik tou pou itilizasyon klinik dirèk.
Selil souch ematopoyetik yo gen yon wo degre oto-renouvèlman ak plizyè potansyèl diferansyasyon. Yo ka pwodui tout selil san ki gen matirite, tankou globil wouj, globil blan, plakèt, ak lenfosit, epi yo ka rebati tout sistèm ematopoyetik la. Ekspansyon in vitro selil souch ematopoyetik yo mande pou kenbe kapasite oto-renouvèlman yo pandan y ap anpeche diferansyasyon yo tou, sa ki fè li yon teknoloji ki trè difisil. Nan dènye ane yo, yon gwo kantite eksperyans te montre ke diferansyasyon selil souch ematopoyetik yo depann de sitokin. Nou pral rezime an bref faktè yo ak efè yo itilize nan kilti selil souch ematopoyetik yo.

Faktè selil souch (SCF)
Faktè selil souch (SCF) se yon faktè ki aji lè li ankre epi eksprime reseptè tirozin c-Kit la sou sifas tout HSC yo. Yon ekspresyon c-Kit ki defektye mennen nan yon diminisyon nan kantite ekspansyon HSC yo. Kounye a, prèske tout konbinezon sitokin yo itilize nan eksperyans kilti HSC yo gen SCF. Anplis de sa, ni SCF ni FL3 fè pati fanmi reseptè tirozin kinaz TKR yo, ki gen yon efè sinèjik sou ekspansyon selil ematopoyetik primitif yo. Lè SCF mare ak TKR espesifik, li transmèt siyal bay selil yo, sa ki inisye divizyon ak ekspansyon selil pwogéniteur yo byen bonè, sa ki pèmèt selil yo kòmanse ekspansyon epi anpeche apoptoz apre yo fin konplete faz G0 a.

Tronbopoyetin (Tpo)
Okòmansman, yo te kwè TPO te yon faktè kwasans espesifik pou megakaryosit, li te fè pati kategori sitokin ki aji espesifikman e ki ka kenbe ekspansyon, diferansyasyon, matirasyon, divizyon ak fòmasyon plakèt fonksyonèl nan megakaryosit yo. Li se faktè ki pi pito pou ekspansyon megakaryosit yo. Nan dènye ane yo, eksperyans yo te konfime ke TPO jwe yon wòl enpòtan nan pwomosyon ekspansyon HSC nan etid in vitro, epi lè yo konbine avèk lòt sitokin, li ka ogmante kantite total inite ki fòme koloni ak pliye ekspansyon selil souch CD34+ yo. Espesyalman nan konbinezon FL3, li ka kenbe kwasans ak ekspansyon selil souch CD34+ nan san kòd lonbrit la alontèm.

Entèleukin-3 (IL-3)
Interleukin-3 (IL-3), ke yo rele tou masSelil T Faktè kwasans lan, se yon sitokin pleiotropik ki pwodui sitou pa lenfosit T aktive, ki ka estimile pwopagasyon ak diferansyasyon HSC pluripotans ak diferan selil pwogéniteur oryante liyaj. Apre eterodimerizasyon pwovoke pa IL-3 nan reseptè sifas selil souch yo, yo ka mare ak anpil pwoteyin transdiksyon siyal, tankou chemen transducteur siyal ak aktivatè transkripsyon Janus kinase (JAK/STAT), kidonk estimile yon koule siyal desregle epi patisipe nan règleman ekspansyon selil souch. IL-3 kapab tou aktive chemen kinaz reglemante siyal ekstraselilè (ERK) ak chemen c-jun aminotransferaz (JNK), sa ki pwovoke kwasans, ekspansyon ak siviv selil souch yo.

Entèleukin-6 (IL-6)
IL-6 se yon sitokin miltidireksyonèl ki jwe yon wòl enpòtan nan defans lame a lè li regle repons iminitè ak enflamatwa yo. IL-6 pwodui pa selil T, monosit, fibroblas, selil andotelyal, ak keratinosit, epi li gen plizyè fonksyon byolojik. Li ka ankouraje diferansyasyon selil B ak pwodiksyon antikò, sinèjikman IL-3 jwe yon wòl nan devlopman megakaryosit ak pwodiksyon plakèt, pwovoke ekspresyon pwoteyin faz egi nan fwa a, epi regle metabolis zo. IL-6 transmèt siyal atravè sistèm reseptè IL-6 la, ki konpoze de de chenn: IL-6Rα ak gp130. STAT3 se molekil desizif nan kenbe eta endiferansye selil souch anbriyonè yo, pandan ke IL-6 se pwomotè inisyal chemen siyalizasyon JAK/STAT3 la.

Ligand LFLT3 (FL)
Ligand FLT3 la se yon faktè kwasans ki kontwole ekspansyon selil ematopoyetik bonè yo. Ligand FLT3 la mare ak selil ki eksprime reseptè tirozin kinaz FLT3. Ligand FLT3 la li menm pa estimile ekspansyon selil ematopoyetik bonè yo, men pito li pwovoke kwasans ak diferansyasyon sinèrjikman ak lòt CSF ak interleukin. Kontrèman ak SCF, ligand FLT3 la pa gen okenn efè sou selil mastozit yo. Yo idantifye plizyè soutip ligand FLT3. Fòm byoaktif prensipal la ankre sou sifas selil la kòm domèn ekstraselilè pwoteyin transmembranè a (209a.). Izomè ki lye ak manbràn nan ka fann pa pwoteyin pou jenere izomè idrosolubl byolojikman aktif.

FMS-reglis Chinwa 3
Kinaz tirozin 3 (FL3) ki sanble ak FMS la, ki trè eksprime nan selil CD34+CD38dim, transmèt siyal nan selil la lè li lye ak reseptè aktif tirozin kinaz (TKR) espesifik li yo. FL3 aji sou HSC/HPC epi li egzèse regilasyon ematopoyetik lè li lye ak TKR sou sifas selil la. FL3 se tou yon faktè estimilan selil progéniteur bonè ki trè enpòtan, ki gen yon efè pwomosyon siyifikatif sou ekspansyon in vitro HSC/HPC. Li ka anpeche selil souch CD34+ yo diferansye piti piti epi diminye HPC pandan ekspansyon in vitro.

Faktè kwasans transfòmasyon - β
Faktè kwasans transfòme - β, Soutip mamifè yo ki rele faktè kwasans transfòme - β1, β2 ak β3 emèt siyal atravè menm reseptè a, sa ki lakòz repons byolojik ki sanble. Yo se sitokin miltifonksyonèl ki kontwole ekspansyon selilè, kwasans, diferansyasyon ak mouvman, osi byen ke sentèz ak depo matris ekstraselilè. Selil estwòm mwèl zo yo pwodui faktè kwasans transfòme - β (TGF-β). Li anpeche HSC/HPC bonè yo antre nan faz S la, sa ki lakòz pifò HSC/HPC yo nan faz G0.

Pwoteyin enflamatwa makrofaj-1 α
Pwoteyin enflamatwa makrofaj-1β (MIP-1β) se yon antagonis natirèl MIP-1α, ki ka akonpaye pa li. Li ka soulaje efè inibitwa MIP-1α sou HSC/HPC bonè epi anpeche HSC retounen nan yon eta inaktif.

P38
P38, kòm yon molekil siyal ki fè pati fanmi kinaz pwoteyin aktive mitojèn (MAPK), inibi ekspansyon in vitro HSC yo anba kondisyon nòmoksik. Eksperyans yo montre ke lè HSC yo ajoute nan medya kilti san serom ki gen TPO, SCF, ak FL3, estrès oksidatif aktive p38 ak p16, sa ki mennen nan yon diminisyon siyifikatif nan kantite HSC sourit.

Faktè estimilan koloni granulomakrofaj (GM-CSF)
Faktè estimilan koloni makrofaj granulosit se yon medikaman yo itilize klinikman pou divès kòz lesopeni oswa granulositopeni. Ajan mobilizasyon selilè aktyèl la se faktè estimilan koloni makrofaj granulosit (GM-CSF), ki pa sèlman ogmante kantite selil souch ematopoyetik nan san periferik, men tou li ede nan fonksyon kadyak ak lòt fonksyon.

Faktè estimilan koloni granulosit (G-CSF)
Efè faktè ki estimile koloni granulosit yo jeneralman gen ladan yo prezantasyon antijèn, amelyorasyon fonksyon makrofaj, ak pwomosyon ekspansyon selil souch ematopoyetik yo. Faktè ki estimile koloni granulosit la se yon ajan mobilizasyon pwisan pou selil souch mwèl zo a, ki ka estimile ekspansyon selil souch mwèl zo otològ yo epi mobilize yo soti nan mwèl zo a nan san periferik.

Eritropoyetin (EPO)
Eritropoyetin (EPO) se prensipal faktè estimilan nan diferansyasyon ematopoyetik, ki ka ankouraje diferansyasyon selil souch ematopoyetik yo an globil wouj primitif, akselere divizyon ak ekspansyon jèn globil wouj yo, ankouraje sentèz emoglobin, epi tou jwe yon wòl enpòtan nan etid diferansyasyon pwovoke pa globil wouj yo.
Selil souch ematopoyetik yo gen potansyèl pou oto-renouvèlman ak diferansyasyon milti-direksyonèl. Konbinezon diferan faktè gen efè diferan sou ekspansyon selil souch ematopoyetik yo. Itilizasyon selil souch ematopoyetik yo ka selektivman pwovoke pwodiksyon plizyè selil, ki san dout bay nouvo lide pou ekspansyon selil NK yo. Kounye a, selil NK yo ka pwovoke soti nan selil souch anbriyonè ak iPSC, men tou de selil souch anbriyonè ak selil souch pluripotans pwovoke yo bezwen transfòme an selil souch ematopoyetik anvan yo ka diferansye an selil NK. Se poutèt sa, selil souch ematopoyetik yo jwe yon pon endispansab nan pwosesis sa a. Avantaj selil NK ki sòti nan selil souch yo se ke yo ka itilize sou demann, yo gen yon omojènite fò, liberasyon sitokin ki ba, ak yon aktivite touye fò. Se poutèt sa, toujou gen yon gwo antouzyasm pou eksplore selil NK ki sòti nan selil souch sou mache a. Gen literati sou endiksyon selil souch nan selil NK. Nou sitou konsantre sou faktè yo mansyone nan literati a.

1. Selil NK ki sòti nan selil souch anbriyonik imen

Yo te transfere HESC yo nan ko-kilti avèk liy selil estwòm mwèl zo murin M210-B4 nan yon medyòm ki gen RPMI 1640, 15% seròm fetal bovin defini, 2 mM L-glutamin, 1% asid amine ki pa esansyèl, 1% penisilin/streptomyosin, ak 0.1 mM -merkaptoetanol avèk chanjman medyòm chak 2 a 3 jou jan yo te dekri deja. Apre 17 a 20 jou, yo te prepare sispansyon yon sèl selil epi yo te izole selil CD34+CD45+ yo, jan yo te dekri deja. Selil izole yo te transfere nan yon dezyèm ko-kilti ak liy selil estwòm AFT024 ki sòti nan fwa fetis sourit la nan yon medyòm ki gen yon melanj 1:2 nan medyòm Dulbecco modifye Eagle/Ham F12, 20% serom imen AB inaktive pa chalè, 2 mM L-glutamin, 1% penisilin/streptomyosin, 5 ng/mL selenit sodyòm, 50μM etanolamin, 25μM -merkaptoetanol, 20 mg/mL asid ascorbic, interleukin-3, faktè selil souch, IL-15, ligand tirozin kinaz 3 ki sanble ak Fms, ak IL-7. Selil yo te manje ak medyòm fre pa chanjman mwatye medyòm chak 5 a 6 jou. Apre 30 a 35 jou nan kilti, selil yo te rekòlte, filtre nan yon filt 70-μm, epi itilize pou plis analiz.

2. Selil NK ki sòti nan selil souch pliripotans imen

Nou te rekòlte selil ki gen 18-21 jou pou anrichi selil pwogéniteur CD34+ CD45+ yo. Nou te mete san mil selil CD34+ CD45+ sou estwòm EL08-1D2 a avèk 1 ml sitokin inisyatè selil NK (IL-3, IL7, IL-15, faktè selil souch, ak ligand reseptè-3 tirozin kinaz ki sanble ak fms). Nou te rafrechi kilti selil NK yo ak 0.5 ml mwayen ki gen sitokin chak 4-5 jou. Nou te mezire selil NK ki matirite yo nan 28-35 jou kilti sou EL08-1D2.

Sitokin ak faktè kwasans ki gen rapò ak selil souch T&L yo

Konsènan T&L
T&L Biotechnology Ltd., fonde an 2011, konsantre sou rechèch ak devlopman matyè premyè ak reyaktif klas GMP pou terapi selilè ak jèn (CGT). Nou angaje nou pou bay pwodwi ak sèvis serye pou syans lavi.