Kit de culture cellulaire AMMS®NK 3.0

La thérapie par cellules tueuses naturelles (NK) est devenue un axe de recherche essentiel en immunothérapie, démontrant un potentiel remarquable en oncologie. Les cellules NK sont des lymphocytes innés dotés d'une activité cytotoxique à large spectre, capables de cibler les cellules tumorales, les cellules infectées par un virus et d'autres entités pathologiques. À la différence des thérapies classiques par cellules T, les cellules NK exercent des effets cytotoxiques immédiats sans amorçage antigénique préalable, permettant une action thérapeutique rapide, indépendamment de la spécificité antigénique tumorale.

Figure 1. Mécanismes antitumoraux des cellules NK
(Source de l'image : Acta Pharmaceutica Sinica)

Les cellules NK peuvent provenir de diverses origines, notamment du sang périphérique, du sang de cordon ombilical (SCO), des cellules souches pluripotentes induites (CSPi) et de la lignée cellulaire NK92. Des études montrent que les cellules NK et leurs progéniteurs dérivés du SCO présentent la plus grande abondance parmi les sources disponibles. Le phénotype naïf des cellules NK dérivées du SCO réduit les risques de réaction du greffon contre l'hôte (GVHD), tandis que leur grande disponibilité et leur capacité proliférative supérieure font du SCO une source stratégique pour la production de cellules NK. Le premier essai clinique CAR-NK a notamment utilisé des cellules NK dérivées du SCO. L'importance croissante des cellules NK-SCO dans la recherche en immunothérapie souligne l'enjeu crucial que représente l'expansion évolutive et de haute pureté des cellules NK.in vitropour la traduction clinique.

Le kit de culture cellulaire AMMS®NK 3.0 est conçu pour ex vivoActivation et expansion de cellules NK de haute pureté à partir de cellules mononucléaires du sang de cordon ombilical (CBMC) fraîches ou cryoconservées. Un système de culture de 2 litres permet d'obtenir des rendements de 4 à 6 milliards de cellules avec une pureté NK supérieure à 90 %.

​Caractéristiques principales​

• ​Culture chimiquement définie​
  ​​
• Compatibilité des échantillons : CBMC UCB frais ou cryoconservés​
  ​
• Formulation sans xéno​
  ​
• Expansion à haut rendement : 4 à 6 milliards de cellules par système de 2 L avec une pureté NK > 90 %

Données de performance

​
Figure 1. Expansion cellulaire totale et viabilité des cellules NK dérivées d'UCB cultivées avec le kit de culture cellulaire AMMS®NK 3.0.

​
Figure 2. Pourcentage de la population de cellules CD3-CD56+ dans les cellules NK dérivées d'UCB cultivées avec le kit de culture cellulaire AMMS®NK 3.0

Précautions
1. Exigences relatives à l'échantillon :
1. Si le volume sanguin du cordon ombilical (anticoagulant inclus) est inférieur à 80 ml ou si le prélèvement de cellules NK attendu est supérieur, il est recommandé d'utiliser du HPL plutôt que du plasma autologue. Le taux de prolifération cellulaire du HPL est environ 1 à 2 fois supérieur à celui du plasma autologue.
2. L’opération doit être réalisée dans les 12 heures suivant le prélèvement sanguin.
③ Il est recommandé que la densité de congélation des échantillons congelés soit de 2 à 4 x 10 7/mL et que le taux de viabilité après récupération ne soit pas inférieur à 80 %. Le plasma HPL doit être utilisé à la place du plasma autologue lors de la culture d'échantillons de sang de cordon ombilical. Le plasma autologue doit être utilisé pour les échantillons de sang périphérique (anticoagulant héparine sodique), et le plasma HPL peut également être utilisé à la place du plasma autologue. 2. Densité vasculaire : la densité cellulaire initiale du flacon est recommandée à 1 x 10 6 cellules/mL. En cas de présence de plus de globules rouges, la numération par fluorescence ou par lyse des globules rouges doit être choisie pour éviter d'affecter la densité cellulaire du flacon.
3、Densité du fluide : la densité après remplacement du fluide ne doit pas être inférieure à 1x10 6/mL.
4、Utilisation du milieu de culture :
1 Le milieu de culture doit être réchauffé naturellement à température ambiante avant chaque perfusion.
2. Ne mettez pas la totalité du flacon de milieu de culture dans l'incubateur à 37°C pour le remettre en température, sinon cela accélérera l'inactivation des cytokines dans le milieu de culture supplémenté.
Réactif CGT de qualité GMP
③ Le milieu complet préparé a une courte durée de conservation et il est recommandé de l'utiliser en une semaine environ.
5. Manipulation et conservation appropriées du plasma : voir les instructions pour plus de détails. Le plasma centrifugé doit être limpide.
6. Utilisation des sacs de culture : Lorsque le volume de culture est inférieur à 1 L, les sacs de culture doivent être pliés avant d'être placés. Il est recommandé d'utiliser le modèle recommandé par notre entreprise.
7. Temps d'incubation : A. Le facteur doit être incubé à 4 °C toute la nuit dans un lit plat. (En cas d'urgence, essayer d'incuber à 37 °C pendant 2 heures.)
8、Ne secouez pas le flacon de culture à volonté pendant la phase initiale de la culture : sinon, le groupe de clones activés flottera facilement et le facteur de revêtement réduira l'activation du groupe cellulaire.
9. Utilisation des facteurs : Afin de réduire la perte de facteurs accrochés au mur, il est recommandé d'effectuer une centrifugation avant utilisation. Placer le flacon contenant les facteurs dans un tube à centrifuger de 50 ml et centrifuger à 1 000 tr/min pendant 1 à 2 minutes.
10. Entretien de l'équipement : vérifier régulièrement la température et la concentration de l'incubateur à CO2 et remplacer le filtre à temps. L'enceinte de sécurité biologique doit être entretenue et nettoyée régulièrement.
11、Surveillance environnementale : remplacer régulièrement les filtres primaires, moyens et haute efficacité pour garantir les normes environnementales des zones propres.
12. Types et modèles fixes de consommables expérimentaux : l'impact des changements de modèles et de spécifications sur les effets de culture doit être évalué à l'avance, comme les flacons de culture de 75 cm2 et les sacs de culture cellulaire.