Κιτ απομόνωσης CD4 MaxSortin®

Το κιτ διαχωρισμού CD4 MaxSortin® μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τη διαλογή ανθρώπινων CD4+ Τ κυττάρων. Μέσω της επώασης μαγνητικών σφαιριδίων διαχωρισμού CD4 σε νανοκλίμακα με κύτταρα, μπορεί να επιτευχθεί η διαλογή των CD4+ Τ κυττάρων. Τα μαγνητικά σφαιρίδια διαχωρισμού CD4 σε νανοκλίμακα επωάζονται με μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος (PBMCs) και στη συνέχεια υποβάλλονται σε μαγνητικό διαχωρισμό, ο οποίος επιτρέπει τον διαχωρισμό και τον εμπλουτισμό των CD4+ Τ κυττάρων, παίζοντας ρόλο στον καθαρισμό των CD4+ Τ κυττάρων και είναι εφαρμόσιμο στην παραγωγή προϊόντων κυτταρικής θεραπείας.

1. Επαναιωρήστε ανθρώπινα PBMCs σε ρυθμιστικό διάλυμα PBS που περιέχει 1% ανθρώπινη αλβουμίνη ορού (HSA). Λάβετε ένα δείγμα για καταμέτρηση και μεταφέρετε 1×10⁷ κύτταρα σε ένα σωληνάριο EP 1,5 mL. Στη συνέχεια, φυγοκεντρήστε στις 1500 rpm για 5 λεπτά.
2. Απορρίψτε το υπερκείμενο υγρό, πάρτε 80 μL ρυθμιστικού διαλύματος διαλογής κυττάρων MaxSortin® για να επαναιωρήσετε τα κύτταρα, προσθέστε 20 μL μαγνητικών σφαιριδίων διαχωρισμού CD4, ανακατέψτε καλά και στη συνέχεια τοποθετήστε τα σε ψυγείο στους 2 - 8 °C για επώαση για 15 λεπτά.
3. Πάρτε τη στήλη διαχωρισμού L MaxSortin® και τοποθετήστε την στον διαλογέα μαγνητικά ενεργοποιούμενων κυττάρων (MACS) και ξεπλύνετέ την δύο φορές με 1 mL ρυθμιστικού διαλύματος διαλογής κυττάρων MaxSortin®.
4. Βγάλτε το δείγμα που έχει ολοκληρώσει την επώαση από το ψυγείο στους 2 - 8 °C, προσθέστε 1 mL διαλύματος MACS, φυγοκεντρήστε στις 1500 rpm για 5 λεπτά και απορρίψτε το υπερκείμενο υγρό.
5. Προσθέστε 1 mL ρυθμιστικού διαλύματος διαλογής κυττάρων MaxSortin® για την επαναιώρηση των κυττάρων και προσθέστε το δείγμα στη στήλη διαχωρισμού. Αφού ρέει φυσικά, προσθέστε το ρυθμιστικό διάλυμα διαλογής κυττάρων MaxSortin® σε δύο δόσεις, 1 mL κάθε φορά. Συλλέξτε το έκλουσμα σε έναν φυγοκεντρικό σωλήνα των 15 mL.
6. Αφού ρέει όλο το ρυθμιστικό διάλυμα διαλογής κυττάρων MaxSortin®, αφαιρέστε τη στήλη διαχωρισμού από τον διαλογέα MACS και τοποθετήστε την σε έναν άλλο νέο σωλήνα φυγοκέντρησης των 15 mL. Προσθέστε 3 mL ρυθμιστικού διαλύματος διαλογής κυττάρων MaxSortin® στη στήλη διαχωρισμού και χρησιμοποιήστε το έμβολο που συνοδεύει τη στήλη διαχωρισμού για να σπρώξετε το υγρό απευθείας προς τα έξω.
7. Τοποθετήστε τον φυγοκεντρικό σωλήνα των 15 mL που περιέχει το συλλεγμένο υγρό σε μια οριζόντια φυγόκεντρο και φυγοκεντρήστε στις 1500 στροφές/λεπτό για 5 λεπτά.
8. Μετά τη φυγοκέντρηση, αδειάστε το υπερκείμενο υγρό, πάρτε 1 mL διαλύματος 1× Dulbecco με ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών (DPBS) για να επαναιωρήσετε τα κύτταρα, καταμετρήστε τα κύτταρα και πραγματοποιήστε ανίχνευση με κυτταρομετρία ροής.