MaxSortin® CD4-Isolationskit

Das MaxSortin® CD4 Separation Kit eignet sich zur Sortierung menschlicher CD4+ T-Zellen. Durch die Inkubation nanoskaliger magnetischer CD4-Separationskügelchen mit Zellen gelingt die Sortierung von CD4+ T-Zellen. Die nanoskaligen magnetischen CD4-Separationskügelchen werden mit peripheren mononukleären Blutzellen (PBMCs) inkubiert und anschließend einer magnetischen Trennung unterzogen. Dies ermöglicht die Trennung und Anreicherung von CD4+ T-Zellen, trägt zur Reinigung von CD4+ T-Zellen bei und ist für die Herstellung von Zelltherapieprodukten geeignet.

1. Humane PBMCs in PBS-Puffer mit 1 % humanem Serumalbumin (HSA) resuspendieren. Eine Probe zur Zählung entnehmen und 1 × 10⁷ Zellen in ein 1,5-ml-EP-Röhrchen überführen. Anschließend 5 Minuten bei 1500 U/min zentrifugieren.
2. Den Überstand verwerfen, 80 μl MaxSortin® Cell Sorting Buffer entnehmen, um die Zellen zu resuspendieren, 20 μl magnetische CD4-Separationskügelchen hinzufügen, gut mischen und dann zur Inkubation für 15 Minuten in einen Kühlschrank bei 2 - 8 °C stellen.
3. Nehmen Sie die MaxSortin® L-Separation Column, platzieren Sie sie auf dem magnetisch aktivierten Zellsortierer (MACS) und spülen Sie sie zweimal mit 1 ml MaxSortin® Cell Sorting Buffer.
4. Nehmen Sie die Probe, deren Inkubation abgeschlossen ist, aus dem Kühlschrank bei 2–8 °C, geben Sie 1 ml MACS-Lösung hinzu, zentrifugieren Sie sie 5 Minuten lang bei 1500 U/min und verwerfen Sie den Überstand.
5. 1 ml MaxSortin® Cell Sorting Buffer hinzufügen, um die Zellen zu resuspendieren, und die Probe in die Trennsäule geben. Nach dem natürlichen Ausfluss MaxSortin® Cell Sorting Buffer in zwei Portionen zu je 1 ml hinzufügen. Das austretende Material in einem 15-ml-Zentrifugenröhrchen auffangen.
6. Nachdem der gesamte MaxSortin® Zellsortierpuffer abgelaufen ist, entfernen Sie die Trennsäule aus dem MACS-Sorter und setzen Sie sie in ein neues 15-ml-Zentrifugenröhrchen ein. Geben Sie 3 ml MaxSortin® Zellsortierpuffer in die Trennsäule und drücken Sie die Flüssigkeit mit dem mitgelieferten Kolben direkt heraus.
7. Legen Sie das 15-ml-Zentrifugenröhrchen mit der gesammelten Flüssigkeit in eine horizontale Zentrifuge und zentrifugieren Sie es 5 Minuten lang bei 1500 U/min.
8. Gießen Sie nach der Zentrifugation den Überstand ab, entnehmen Sie 1 ml 1 × Dulbeccos phosphatgepufferte Kochsalzlösung (DPBS), um die Zellen erneut zu suspendieren, zählen Sie die Zellen und führen Sie eine Durchflusszytometrie-Erkennung durch.