MaxSortin® CD14-Isolationskit

Stock: Auf Lager
Modell: TL-625KIT

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Produktdetail

Zusammensetzung

Name	Artikelnummer	Spezifikation	Lagerbedingungen	Haltbarkeit
MaxSortin® CD14-Trennmagnetkügelchen	TL-625	2 ml für 1×10⁹ Zellen insgesamt	2 - 8 °C	6 Monate
MaxSortin® Zellsortierungspuffer	MS-BF100	100 ml	2 - 8 °C	12 Monate
MaxSortin® L-Trennsäule	MS-CL01	1 Stück	10 - 35 °C	12 Monate

Produktdetails

Reaktive Spezies: Menschlich

Magnetisches Bead-Endotoxin:

Aussehen der magnetischen Perlen: Braune Flüssigkeit

Bestimmungsgemäße Verwendung

Das MaxSortin® CD14 Separation Kit dient zur Anreicherung oder Entfernung von Monozyten und Makrophagen aus humanen peripheren mononukleären Blutzellen (PBMCs). Durch die Inkubation nanoskaliger magnetischer CD14-Separationskügelchen mit Zellen kann die Sortierung von CD14+-Zellen erreicht werden. Durch die Inkubation mit MaxSortin® CD14-Separationsmagnetkügelchen mit PBMCs und anschließender magnetischer Trennung können CD14+-Zellen getrennt und angereichert werden, was zur Entfernung oder Reinigung von CD14+-Zellen beiträgt.

Gebrauchsanweisung

Experimentelle Verfahren

1. Humane PBMCs in PBS-Puffer mit 1 % humanem Serumalbumin (HSA) resuspendieren. Eine Probe zur Zählung entnehmen und 1 × 10⁷ Zellen in ein 1,5-ml-Ep-Röhrchen überführen. Anschließend 5 Minuten bei 1500 U/min zentrifugieren.
2. Den Überstand verwerfen, 80 μl MaxSortin® Cell Sorting Buffer entnehmen, um die Zellen zu resuspendieren, 20 μl MaxSortin® CD14 Separation Magnetic Beads hinzufügen, gut vermischen und dann zur Inkubation für 15 Minuten in einen Kühlschrank bei 2 - 8 °C stellen.
3. Nehmen Sie die MaxSortin® L-Separation Column, platzieren Sie sie auf dem magnetisch aktivierten Zellsortierer (MACS) und spülen Sie sie zweimal mit 1 ml MaxSortin® Cell Sorting Buffer.
4. Nehmen Sie die Probe nach der Inkubation aus dem Kühlschrank bei 2–8 °C, geben Sie 1 ml MaxSortin® Cell Sorting Buffer hinzu, zentrifugieren Sie sie 5 Minuten lang bei 1500 U/min und verwerfen Sie den Überstand.
5. 1 ml MaxSortin® Cell Sorting Buffer hinzufügen, um die Zellen zu resuspendieren, und die Probe in die Trennsäule geben. Nach dem natürlichen Ausfluss MaxSortin® Cell Sorting Buffer in zwei Portionen zu je 1 ml hinzufügen. Das austretende Material in einem 15-ml-Röhrchen auffangen.
6. Nachdem der gesamte MaxSortin® Zellsortierpuffer abgelaufen ist, entfernen Sie die Trennsäule aus dem MACS-Sorter und setzen Sie sie in ein neues 15-ml-Zentrifugenröhrchen ein. Geben Sie 3 ml MaxSortin® Zellsortierpuffer in die Trennsäule und drücken Sie die Flüssigkeit mit dem mitgelieferten Kolben direkt heraus.
7. Legen Sie das 15-ml-Zentrifugenröhrchen mit der gesammelten Flüssigkeit in eine horizontale Zentrifuge und zentrifugieren Sie es 5 Minuten lang bei 1500 U/min.
8. Gießen Sie nach der Zentrifugation den Überstand ab, entnehmen Sie 1 ml 1 × Dulbeccos phosphatgepufferte Kochsalzlösung (DPBS), um die Zellen erneut zu suspendieren, zählen Sie die Zellen und führen Sie eine Durchflusszytometrie-Erkennung durch.

Vorsichtsmaßnahmen

1. Beim Inkubieren der magnetischen Perlen mit Zellen ist es notwendig, diese gründlich zu mischen, um die Sortiereffizienz zu verbessern.

2. Der im Kit enthaltene Puffer und die Trennsäule können für das erste Experiment verwendet werden. Für weitere Experimente sind der MaxSortin® Zellsortierpuffer (Artikelnummer: MS-BF100) und die MaxSortin® L-Trennsäule (Artikelnummer: MS-CL01) separat erhältlich.