AMMS®NK Zellkultur-Kit 3.0

Die Therapie mit natürlichen Killerzellen (NK-Zellen) hat sich zu einem zentralen Forschungsschwerpunkt in der Immuntherapie entwickelt und zeigt ein bemerkenswertes Potenzial in der Onkologie. NK-Zellen sind angeborene Lymphozyten mit breitbandiger zytotoxischer Aktivität, die Tumorzellen, virusinfizierte Zellen und andere pathologische Einheiten gezielt angreifen können. Im Unterschied zu konventionellen T-Zell-Therapien entfalten NK-Zellen unmittelbare zytotoxische Effekte ohne vorherige Antigen-Priming und ermöglichen so eine schnelle therapeutische Wirkung unabhängig von der Tumorantigenspezifität.

​​Abbildung 1. Anti-Tumor-Mechanismen von NK-Zellen​​
(Bildquelle: Acta Pharmaceutica Sinica)

NK-Zellen können aus verschiedenen Quellen stammen, darunter peripheres Blut, Nabelschnurblut (UCB), induzierte pluripotente Stammzellen (iPSCs) und die NK92-Zelllinie. Studien belegen, dass aus UCB gewonnene NK-Zellen und -Vorläuferzellen unter den verfügbaren Quellen am häufigsten vorkommen. Der naive Phänotyp aus UCB gewonnener NK-Zellen reduziert das Risiko einer Graft-versus-Host-Krankheit (GVHD), während ihre breite Verfügbarkeit und ihr überlegenes proliferatives Potenzial UCB als strategische Quelle für die NK-Zellproduktion positionieren. Bemerkenswert ist, dass in der ersten klinischen CAR-NK-Studie aus UCB gewonnene NK-Zellen eingesetzt wurden. Die wachsende Bedeutung von UCB-NK-Zellen in der Immuntherapieforschung unterstreicht die Herausforderung einer skalierbaren, hochreinen NK-Zellexpansion.in vitrofür die klinische Übersetzung.

Das AMMS®NK Cell Culture Kit 3.0 ist konzipiert für ex vivoAktivierung und Expansion hochreiner NK-Zellen aus frischen oder kryokonservierten mononukleären Zellen aus Nabelschnurblut (CBMCs). Ein 2-Liter-Kultursystem erzielt Erträge von 4–6 Milliarden Zellen mit einer NK-Reinheit von über 90 %.

​Hauptmerkmale​

• ​Chemisch definierte Kultur​
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• Probenkompatibilität: Frische oder kryokonservierte UCB CBMCs​​
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• Xeno-freie Formulierung​​
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• Ergiebige Expansion: 4–6 Milliarden Zellen pro 2-Liter-System mit >90 % NK-Reinheit​

Leistungsdaten​

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Abbildung 1. Gesamtzellwachstum und Lebensfähigkeit von aus Nabelschnurblut gewonnenen NK-Zellen, kultiviert mit dem AMMS®NK Cell Culture Kit 3.0​

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Abbildung 2. Prozentsatz der CD3-CD56+-Zellpopulation in aus Nabelschnurblut gewonnenen NK-Zellen, kultiviert mit dem AMMS®NK Cell Culture Kit 3.0

Vorsichtsmaßnahmen
1. Beispielanforderungen:
① Wenn das Blutvolumen des Nabelschnurbluts (einschließlich Antikoagulans) weniger als 80 ml beträgt oder die erwartete NK-Ernte höher ist, wird die Verwendung von HPL anstelle von autologem Plasma empfohlen. Die Zellproliferationsrate von HPL ist etwa 1-2 mal höher als die von autologem Plasma.
2. Der Vorgang sollte innerhalb von 12 Stunden nach der Blutentnahme abgeschlossen sein.
3. Es wird empfohlen, die Gefrierdichte gefrorener Proben auf 2–4 x 10⁻¹/ml zu begrenzen. Die Überlebensrate nach der Wiederherstellung sollte mindestens 80 % betragen. Bei der Kultivierung von Nabelschnurblutproben sollte HPL anstelle von autologem Plasma verwendet werden. Für periphere Blutproben (Heparin-Natrium-Antikoagulans) sollte autologes Plasma verwendet werden. Alternativ kann auch HPL verwendet werden. 2. Gefäßdichte: Die anfängliche Zelldichte der Flasche sollte 1 x 10⁻¹ Zellen/ml betragen. Bei erhöhtem Erythrozytengehalt sollte die Fluoreszenzzählung oder die Lysezählung der Erythrozyten gewählt werden, um die Zelldichte der Flasche nicht zu beeinträchtigen.
3. Flüssigkeitsdichte: Die Dichte nach dem Flüssigkeitswechsel sollte nicht unter 1 x 106/ml liegen.
4. Verwendung des Kulturmediums:
① Das Kulturmedium sollte vor jeder Infusion auf natürliche Weise auf Raumtemperatur erwärmt werden.
2. Geben Sie nicht die gesamte Flasche mit dem Kulturmedium zum erneuten Erhitzen in den 37 °C heißen Inkubator, da dies sonst die Inaktivierung der Zytokine im ergänzten Kulturmedium beschleunigt.
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3. Das zubereitete Komplettmedium hat eine kurze Haltbarkeitsdauer und es wird empfohlen, es innerhalb von etwa einer Woche aufzubrauchen.
5. Ordnungsgemäße Handhabung und Aufbewahrung des Plasmas: Einzelheiten finden Sie in der Anleitung. Zentrifugiertes Plasma sollte klar sein.
6. Verwendung von Kulturbeuteln: Wenn das Kulturvolumen weniger als 1 l beträgt, müssen die Kulturbeutel vor dem Einlegen gefaltet werden. Es wird empfohlen, das von unserem Unternehmen empfohlene Modell zu verwenden.
7. Inkubationszeit: A. Der Faktor sollte über Nacht bei 4 °C in einem Flachbett inkubiert werden. (Im Notfall versuchen Sie, 2 Stunden lang bei 37 °C zu inkubieren.)
8. Schütteln Sie die Kulturflasche während der Anfangsphase der Kultur nicht willkürlich. Andernfalls schwimmt die aktivierte Klongruppe leicht auf und der Beschichtungsfaktor verringert die Aktivierung der Zellgruppe.
9. Verwendung von Faktoren: Um den Verlust von an der Wand hängenden Faktoren zu reduzieren, wird empfohlen, vor der Verwendung eine Zentrifugation durchzuführen. Geben Sie das Fläschchen mit den Faktoren in ein 50-ml-Zentrifugenröhrchen und zentrifugieren Sie es 1–2 Minuten lang bei 1000 U/min.
10. Gerätewartung: Überprüfen Sie regelmäßig die Temperatur und Konzentration des CO2-Inkubators und tauschen Sie den Filter rechtzeitig aus. Regelmäßige Wartung und Reinigung des biologischen Sicherheitsschranks.
11. Umweltüberwachung: Ersetzen Sie regelmäßig die Primär-, Mittel- und Hochleistungsfilter, um die Umweltstandards sauberer Bereiche sicherzustellen.
12. Feste Typen und Modelle experimenteller Verbrauchsmaterialien: Die Auswirkungen sich ändernder Modelle und Spezifikationen auf die Kultivierungseffekte sollten im Voraus bewertet werden, beispielsweise 75 cm² große Kulturflaschen und Zellkulturbeutel.