Kit d'isolamentu CD4 MaxSortin®

U Kit di Separazione MaxSortin® CD4 pò esse adupratu per sorte i linfociti T CD4+ umani. Attraversu l'incubazione di perle magnetiche di separazione CD4 à nanoscala cù e cellule, si pò ottene a classificazione di i linfociti T CD4+. I perle magnetiche di separazione CD4 à nanoscala sò incubate cù cellule mononucleari di u sangue perifericu (PBMC) è poi sottumesse à separazione magnetica, chì permette a separazione è l'arricchimentu di i linfociti T CD4+, ghjucendu un rolu in a purificazione di i linfociti T CD4+ è hè applicabile à a produzzione di prudutti di terapia cellulare.

1. Risuspende i PBMC umani in un buffer PBS chì cuntene 1% di albumina di serum umanu (HSA). Piglià un campione per u contu è trasferisce 1 × 10⁷ cellule in una provetta EP di 1,5 mL. Poi centrifugà à 1500 rpm per 5 minuti.
2. Scartate u surnatante, pigliate 80 μL di MaxSortin® Cell Sorting Buffer per risuspendere e cellule, aghjunghjite 20 μL di biglie magnetiche di separazione CD4, mischiate bè è poi mette in frigorifero à 2 - 8 °C per incubazione per 15 minuti.
3. Pigliate a colonna di separazione L MaxSortin® è mettetela nantu à u sorter di classificazione cellulare attivata magneticamente (MACS), è sciacquatela duie volte cù 1 mL di tampone di classificazione cellulare MaxSortin®.
4. Pigliate u campione chì hà cumpletatu l'incubazione da u frigorifero à 2 - 8 °C, aghjunghjite 1 mL di suluzione MACS, centrifugate à 1500 rpm per 5 minuti è scartate u surnatante.
5. Aghjunghjite 1 mL di MaxSortin® Cell Sorting Buffer per risuspendere e cellule, aghjunghjite u campione in a colonna di separazione. Dopu ch'ellu scorri naturalmente, aghjunghjite MaxSortin® Cell Sorting Buffer in duie porzioni, 1 mL ogni volta. Raccoglie l'effluente in una provetta di centrifuga di 15 mL.
6. Dopu chì tuttu u MaxSortin® Cell Sorting Buffer hè statu versatu, cacciate a colonna di separazione da u sorter MACS è mettetela in un altru novu tubu di centrifuga di 15 mL. Aghjunghjite 3 mL di MaxSortin® Cell Sorting Buffer in a colonna di separazione è aduprate u pistone chì vene cù a colonna di separazione per spinghje u liquidu direttamente fora.
7. Pone u tubu di centrifuga di 15 mL chì cuntene u liquidu raccoltu in una centrifuga orizzontale è centrifugà à 1500 rpm per 5 minuti.
8. Dopu a centrifugazione, versate u surnatante, pigliate 1 mL di soluzione salina tamponata cù fosfatu 1× Dulbecco (DPBS) per risuspendere e cellule, cuntà e cellule è realizà a rilevazione per citometria di flussu.