Kit d'aïllament de CD4 MaxSortin®

El kit de separació CD4 MaxSortin® es pot utilitzar per classificar cèl·lules T CD4+ humanes. Mitjançant la incubació de microesferes magnètiques de separació CD4 a nanoescala amb cèl·lules, es pot aconseguir la classificació de cèl·lules T CD4+. Les microesferes magnètiques de separació CD4 a nanoescala s'incuben amb cèl·lules mononuclears de sang perifèrica (PBMC) i després se sotmeten a separació magnètica, que permet la separació i l'enriquiment de cèl·lules T CD4+, jugant un paper en la purificació de cèl·lules T CD4+ i és aplicable a la producció de productes de teràpia cel·lular.

1. Resuspendre les PBMC humanes en tampó PBS que conté un 1% d'albúmina sèrica humana (HSA). Prendre una mostra per al recompte i transferir 1×10⁷ cèl·lules a un tub EP d'1,5 mL. A continuació, centrifugar a 1500 rpm durant 5 minuts.
2. Descarteu el sobrenedant, agafeu 80 μL de tampó de classificació cel·lular MaxSortin® per resuspendre les cèl·lules, afegiu-hi 20 μL de microesferes magnètiques de separació de CD4, barregeu-les bé i poseu-les a la nevera a 2-8 °C per a la incubació durant 15 minuts.
3. Agafeu la columna de separació L MaxSortin® i col·loqueu-la al classificador de cèl·lules activades magnèticament (MACS) i esbandiu-la dues vegades amb 1 mL de tampó de classificació cel·lular MaxSortin®.
4. Traieu la mostra que ha completat la incubació de la nevera a 2-8 °C, afegiu-hi 1 mL de solució MACS, centrifugueu-la a 1500 rpm durant 5 minuts i descarteu el sobrenedant.
5. Afegiu 1 mL de tampó de classificació cel·lular MaxSortin® per resuspendre les cèl·lules i afegiu la mostra a la columna de separació. Després que surti de manera natural, afegiu el tampó de classificació cel·lular MaxSortin® en dues porcions, 1 mL cada vegada. Recolliu l'efluent en un tub de centrífuga de 15 mL.
6. Després que tot el tampó de classificació cel·lular MaxSortin® s'hagi esgotat, retireu la columna de separació del classificador MACS i col·loqueu-la en un altre tub de centrífuga nou de 15 mL. Afegiu 3 mL de tampó de classificació cel·lular MaxSortin® a la columna de separació i utilitzeu el pistó que ve amb la columna de separació per empènyer el líquid directament cap a fora.
7. Col·loqueu el tub de centrífuga de 15 mL que conté el líquid recollit en una centrífuga horitzontal i centrifugueu-la a 1500 rpm durant 5 minuts.
8. Després de la centrifugació, aboqueu el sobrenedant, preneu 1 mL de solució salina tamponada amb fosfat de Dulbecco (DPBS) 1× per resuspendre les cèl·lules, compteu-les i realitzeu la detecció per citometria de flux.