Набор для культывавання клетак AMMS®NK 3.0

Тэрапія натуральнымі клеткамі-кілерамі (NK) стала ключавым напрамкам даследаванняў у імунатэрапіі, дэманструючы значны патэнцыял у анкалогіі. NK-клеткі — гэта прыроджаныя лімфацыты з шырокім спектрам цытатаксічнай актыўнасці, здольныя нацэльвацца на пухлінныя клеткі, клеткі, інфікаваныя вірусам, і іншыя паталагічныя ўтварэнні. У адрозненне ад традыцыйнай Т-клетачнай тэрапіі, NK-клеткі аказваюць неадкладны цытатаксічны эфект без папярэдняй падрыхтоўкі антыгена, што дазваляе хутка тэрапеўтычна дзейнічаць незалежна ад спецыфічнасці пухліннага антыгена.

Малюнак 1. Супрацьпухлінныя механізмы NK-клетак
(Крыніца выявы: Acta Pharmaceutica Sinica)

NK-клеткі могуць быць атрыманы з розных крыніц, у тым ліку з перыферычнай крыві, пупавіннай крыві (ПУК), індуцыраваных плюрыпатэнтных ствалавых клетак (ІПСК) і клетачнай лініі NK92. Даследаванні паказваюць, што NK-клеткі і клеткі-папярэднікі, атрыманыя з ПУК, маюць найбольшую распаўсюджанасць сярод даступных крыніц. Наіўны фенатып NK-клетак, атрыманых з ПУК, зніжае рызыку рэакцыі "трансплантат супраць гаспадара" (РТПХ), а іх шырокая даступнасць і выдатная праліфератыўная здольнасць даюць ПУК стратэгічную магчымасць вытворчасці NK-клетак. Варта адзначыць, што ў першым клінічным выпрабаванні CAR-NK выкарыстоўваліся NK-клеткі, атрыманыя з ПУК. Усё большая вядомасць NK-клетак ПУК у даследаваннях імунатэрапіі падкрэслівае крытычную праблему дасягнення маштабаванага пашырэння NK-клетак высокай чысціні.у прабірцыдля клінічнага перакладу.

Набор для культывавання клетак AMMS®NK 3.0 прызначаны для ex vivoактывацыя і пашырэнне высакаякасных NK-клетак са свежых або крыякансерваваных монануклеарных клетак пупавіннай крыві (CBMC). 2-літровая сістэма культывавання дазваляе атрымаць 4-6 мільярдаў клетак з чысцінёй NK, якая перавышае 90%.

​Асноўныя характарыстыкі​

• ​Хімічна вызначаная культура​
  ​​
• Сумяшчальнасць узораў: свежыя або крыякансерваваныя CBMC UCB​
  ​
• Формула без ксена​
  ​
• Высокапрадукцыйнае пашырэнне: 4-6 мільярдаў клетак на 2-літровую сістэму з чысцінёй NK >90%

Дадзеныя прадукцыйнасці

​
Малюнак 1. Агульная экспансія клетак і жыццяздольнасць NK-клетак, атрыманых з UCB, культываваных з дапамогай набору для культывавання клетак AMMS®NK Cell Culture Kit 3.0

​
Малюнак 2. Працэнт папуляцыі клетак CD3-CD56+ у NK-клетках, атрыманых з UCB, культываваных з дапамогай набору для культывавання клетак AMMS®NK Cell Culture Kit 3.0

Меры засцярогі
1. Патрабаванні да ўзору:
① Калі аб'ём пупавіннай крыві (у тым ліку антыкаагулянт) меншы за 80 мл або чаканы збор NK большы, рэкамендуецца выкарыстоўваць HPL замест аўталагічнай плазмы. Хуткасць праліферацыі клетак HPL прыкладна ў 1-2 разы вышэйшая, чым у аўталагічнай плазме.
② Аперацыю неабходна завяршыць на працягу 12 гадзін пасля ўзяцця крыві.
③ Рэкамендуецца, каб шчыльнасць замарожаных узораў складала 2-4 x 10 7/мл, а жыццяздольнасць пасля аднаўлення не павінна быць ніжэйшай за 80%. Падчас культывавання ўзораў пупавіннай крыві замест аўталагічнай плазмы варта выкарыстоўваць HPL. Аўталагічную плазму варта выкарыстоўваць для ўзораў перыферычнай крыві (антыкаагулянт гепарын натрыю), і HPL таксама можна выкарыстоўваць замест аўталагічнай плазмы. 2. Шчыльнасць сасудаў: пачатковая шчыльнасць клетак у бутэльцы рэкамендуецца складаць 1 x 10 6 клетак/мл. Пры большай колькасці эрытрацытаў варта выбраць падлік флуарэсцэнцыі або падлік лізісу эрытрацытаў, каб пазбегнуць уплыву на шчыльнасць клетак у бутэльцы.
3. Шчыльнасць вадкасці: шчыльнасць пасля замены вадкасці не павінна быць ніжэйшай за 1x10⁶/мл.
4. Выкарыстанне пажыўнага асяроддзя:
① Перад кожнай інфузіяй культуральнае асяроддзе трэба натуральным чынам разагрэць да пакаёвай тэмпературы.
② Не змяшчайце ўсю бутэльку пажыўнага асяроддзя ў інкубатар пры тэмпературы 37℃ для паўторнага нагрэву, інакш гэта паскорыць інактывацыю цытакінаў у дапоўненым пажыўным асяроддзі.
Рэагент CGT класа GMP
③ Гатовае поўнае асяроддзе мае кароткі тэрмін прыдатнасці, і рэкамендуецца выкарыстоўваць яго прыкладна на працягу аднаго тыдня.
5. Правільнае абыходжанне з плазмай і яе захаванне: глядзіце інструкцыі для атрымання падрабязнай інфармацыі. Цэнтрыфугаваная плазма павінна быць празрыстай.
6. Выкарыстанне пасеваў: Калі аб'ём пасеваў меншы за 1 літр, пасыловыя пакеты неабходна скласці перад размяшчэннем. Рэкамендуецца выкарыстоўваць рэкамендаваную мадэль нашай кампаніі.
7. Час інкубацыі: А. Фактар ​​трэба інкубаваць пры тэмпературы 4 ℃ на працягу ночы ў плоскім слоі. (У выпадку надзвычайнай сітуацыі паспрабуйце інкубаваць пры тэмпературы 37 ℃ на працягу 2 гадзін)
8. Нельга страсянуць бутэльку з культурай падчас пачатковай стадыі культывавання: інакш актываваная клонавая група лёгка ўсплыве, і фактар ​​пакрыцця знізіць актывацыю клетачнай групы.
9. Выкарыстанне фактараў: Каб паменшыць страты фактараў, якія вісяць на сцяне, рэкамендуецца правесці цэнтрыфугаванне перад выкарыстаннем. Змесціце флакон з фактарамі ў цэнтрыфужную прабірку аб'ёмам 50 мл і цэнтрыфугуйце пры 1000 абаротаў у хвіліну на працягу 1-2 хвілін.
10. Тэхнічнае абслугоўванне абсталявання: рэгулярна правярайце тэмпературу і канцэнтрацыю CO2 у інкубатары і своечасова мяняйце фільтр. Рэгулярнае тэхнічнае абслугоўванне і чыстка шафы біялагічнай бяспекі.
11. Маніторынг навакольнага асяроддзя: рэгулярна замяняйце першасныя, сярэдне- і высокаэфектыўныя фільтры, каб забяспечыць экалагічныя стандарты чыстых зон.
12. Фіксаваныя тыпы і мадэлі эксперыментальных расходных матэрыялаў: уплыў змены мадэляў і спецыфікацый на эфекты культывавання варта ацаніць загадзя, напрыклад, культуральныя бутэлькі і пакеты для клетачных культур аб'ёмам 75 см².